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NVP-BEZ235对裸鼠胃癌移植瘤的作用
目的 观察NVP-BEZ235单用及联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对NCI-N87裸鼠移植瘤的影响.方法 制备人胃癌细胞株NCI-N87荷瘤鼠.分为对照组(每3d灌胃生理盐水0.02 ml/g,每3d腹腔注射生理盐水0.02 ml/g)、5-Fu组(每3d灌胃生理盐水0.02 ml/g,每3d腹腔注射5-Fu0.025 mg/g)、NVP-BEZ235组(每3d灌胃NVP-BEZ235 0.04 mg/g,每3d腹腔注射生理盐水0.02 ml/g)、联合用药组(每3d灌胃NVP-BEZ235 0.04 mg/g,每3d腹腔注射5-Fu 0.025 mg/g).记录肿瘤体积、重量.Western blot法检测凋亡相关蛋白、磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白、侵袭相关蛋白的改变.结果 构建裸鼠NCI-N87胃癌移植瘤模型,肿瘤相对体积比较:联合用药组(6.84±0.98)小于5-Fu组(8.47±1.44),差异有统计学意义(t=2.303,P=0.044).肿瘤重量(g)比较:联合用药组(0.83 ±0.16)小于5-Fu组(1.20±0.32),差异有统计学意义(t=2.524,P=0.038).Akt、磷酸化Akt (p-Akt)、mTOR相对表达量NVP-BEZ235组(0.56±0.05、0.23 ±0.04、0.50±0.03)显著低于对照组(0.96±0.11、0.68±0.03、0.64±0.12;t=9.739、21.823、3.366,P=0.000、0.000、0.006),联合用药组(0.53±0.06、0.20±0.03、0.51±0.07)显著低于5-Fu组(0.93±0.10、0.51±0.05、0.67±0.04;t8.234、12.489、4.628,P=0.000、0.000、0.002),4组之间差异有统计学意义(F=46.457、263.318、6.678,P =0.000、0.000、0.002).凋亡相关蛋白活化型半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)相对表达量,NVP-BEZ235组(1.28±0.06、1.39±0.08、0.59±0.04)显著高于对照组(0.94 ±0.10、0.99±0.11、1.07±0.07;t=8.660、8.077、17.456,P=0.000、0.000、0.000),联合用药组(1.57±0.09、1.70±0.10、0.37±0.07)显著高于5-Fu组(1.42±0.09、1.50±0.05、0.48±0.07;t =2.737、4.472、2.861,P=0.021、0.003、0.017),4组之间差异有统计学意义(F=71.181、81.393、199.848,P =0.000、0.000、0.000).基质金属蛋白酶(MMP)-9和血管内皮生长因子(VEGF)相对表达量,NVP-BEZ235组(0.44±0.04、0.30±0.05)显著低于对照组(0.59±0.06、0.41±0.03;t5.335、5.550,P=0.000、0.001),联合用药组(0.37±0.04、0.24 ±0.07)显著低于5-Fu组(0.58±0.12、0.36±0.04;t =4.144、3.691,P=0.006、0.005),4组之间差异有统计学意义(F=15.164、20.205,P=0.000、0.000).结论 NVP-BEZ235下调PBK/Akt/mTOR通路的活化水平,促进凋亡,抑制肿瘤的侵袭转移,与5-Fu具有协同作用.
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磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路特异性抑制剂RAD001和LY294002对不同分子特征人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂RAD001和LY294002对人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞株增殖与凋亡的影响,探讨PI3 K/蛋白激酶B (Akt)/mTOR信号通路上下游不同靶点联合阻滞对不同亚型人乳腺癌细胞株的抗肿瘤效应及其机制.方法 体外RAD001和LY294002单独或者联合使用,通过噻唑蓝(MTT)实验计算药物半数抑制剂量(IC50).应用流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡.结果 LY294002和RAD001单药均使能人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231抑制细胞增殖、阻滞周期、诱导细胞凋亡.联合用药后各细胞株的抗肿瘤效应明显增强.结论 针对P13 K/Akt/mTOR信号通路的靶向干预可显著抑制人乳腺癌细胞的增殖,阻滞细胞周期并诱导其凋亡,且通路中不同靶点联合干预的抗肿瘤效应更加显著,尤其是雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人类表皮生长因子受体2(Her-2)均阴性的MDA-MB-231细胞株.
