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不同浓度葡萄糖对大鼠大脑皮层神经元凋亡的影响
目的 探讨不同浓度葡萄糖对大鼠大脑皮层神经元凋亡的影响.方法 取新生1d内SD大鼠的大脑皮层,皮层神经元经原代培养,通过胰蛋白酶消化法获取单细胞悬液,免疫荧光染色鉴定神经元纯度,然后随机分为正常组(葡萄糖浓度为25 mmol·L-1)及50、75、100 mmol·L-1葡萄糖组,Hoechst染色检测细胞凋亡,噻唑蓝比色法检测各组神经元活性.结果 与正常组和50 mmol·L-1葡萄糖组相比,75、100 mmol·L-1葡萄糖组大鼠大脑皮层神经元凋亡率明显升高(P＜0.01),活性显著下降(P＜0.01)；且100 mmol·L-1葡萄糖组大鼠大脑皮层神经元凋亡率高于75 mmol·L-1葡萄糖组(P＜0.01),大鼠大脑皮层神经元活性低于75 mmol·L-1葡萄糖组(P＜0.01).结论 高浓度的葡萄糖可引起大鼠大脑皮层神经元的凋亡,且神经元的凋亡情况呈剂量依赖关系.
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无血清培养富集乳腺癌干细胞的初步研究
目的:探讨富集乳腺癌干细胞的方法,以获得稳定数量的肿瘤干细胞.方法:(1)采用无血清悬浮培养方法,从乳腺癌MDA-MB-435细胞中筛选和培养肿瘤干细胞.(2)采用相差显微镜观察含胰岛素和不含胰岛素的无血清培养基中干细胞球形成大小、数量及随时间生长变化情况.(3)采用荧光显微镜观察Hoechst33342染料对MDA-MB-435肿瘤干细胞染色情况.(4)将MDA-MB-435肿瘤干细胞转入有血清培养基培养诱导分化,观察是否能有分化现象.结果:(1)采用无血清悬浮培养方法筛选和培养MDA-MB435肿瘤干细胞成功.(2)发现不含胰岛素的无血清培养基中,形成的肿瘤干细胞团数量多且体积大.(3)随着培养时间延长,肿瘤干细胞球数量逐渐增多,体积逐渐变大.(4) Hoechst33342染料对肿瘤干细胞染色鉴定,约有90％肿瘤干细胞蓝色荧光染料较弱,呈暗淡区.(5) MDA-MB-435肿瘤干细胞经含血清培养基再次培养,具有分化功能.结论:含生长因子的无血清培养基培养MDA-MB-435细胞,可生成肿瘤干细胞球;不含胰岛素的无血清培养基更适合作为筛选肿瘤干细胞的培养基.
