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p53抑制剂pifithrin-α对肝原代细胞增殖的影响
目的:观察p53抑制剂pifithrin-α对肝原代细胞增殖及增殖相关蛋白表达的影响.方法:肝原代细胞分别经0、10、20和30 μmol/L的pifithrin-α处理1 h后,再用10 nmol/L EGF诱导30、36和48 h,用放射性计数法测定细胞增殖水平.另取肝原代细胞,分3组,对照组常规培养,EGF组用10 nmol/L的EGF诱导,EGF+pifithrin-α组用30 μmol/L pifithrin-α和10 nmol/L EGF诱导,EGF诱导24、30 h后,Western blot法检测细胞中P53、P21、Cyclin D、Cyclin E、pErk蛋白的表达水平.结果:pifithrin-α作用后,EGF诱导的细胞增殖水平均降低,且pifithrin-α浓度越大,增殖水平越低(F剂量=54.690,F时间=214.370,F交互=50.450,P<0.001).与对照组比较,EGF组细胞P53、Cyclin E蛋白表达水平未发生变化,但P21、Cyclin D及 pErk表达水平升高(P<0.05),EGF+pifithrin-α组细胞P21、Cyclin D及pErk蛋白表达水平较EGF组降低(P<0.05).结论:P53蛋白可能通过激活MAPK信号通路、上调Cyclin D表达,从而发挥促进肝原代细胞增殖的作用.
关键词： P53 增殖 肝原代细胞 pifithrin-α -
重组质粒pEGFP-N2/XPD和Pifithrin-α对肝癌细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨人着色性干皮病基因D(xeroderma pigmentosum D,XPD)和P53对肝癌细胞HepG2.2.15增殖凋亡及P21等基因表达的影响.方法 用脂质体转染法将空载质粒pEGFP-N2和重组质粒pEGFP-N2/XPD转染HepG2.2.15,然后给予20 μmol/L的Pifithrin-α(P53抑制剂)孵育24 h.实验分为5组:空白对照组、pEGFP-N2组、pEGFP-N2/XPD组、pEGFP-N2/XPD+Pifithrin-α组和Pifithrin-α组.用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况;用RT-PCR和Western blot检测XPD、P53、磷酸化P53(phosphorylated P53,p-P53)、P21和乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)的表达;用MTT法检测细胞活力;用流式细胞仪检测凋亡率.结果 在荧光显微镜下,可在转染了空载质粒pEGFP-N2和重组质粒pEGFP-N2/XPD的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;RT-PCR和Western blot检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使XPD表达增高(P＜0.001);XPD表达升高使P53、p-P53(ser-15)、P21表达增高,同时使得HBx表达降低,而Pifithrin-α能抑制XPD这一作用(P＜0.001).MTT结果显示,XPD表达升高抑制了细胞活力,而Pifithrin-α能抑制XPD减弱细胞活力的作用(P＜0.001).流式细胞仪结果显示,XPD表达增高引起了细胞凋亡率增加,而Pifithrin-α能抑制XPD诱导细胞凋亡的作用(P＜0.001).结论 XPD能通过P53通路抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡,上调P21的表达以及下调HBx的表达.
关键词： 着色性干皮病基因D pifithrin-α HepG2.2.15 增殖 凋亡
