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三甲基化组蛋白H3赖氨酸4文献资料
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三甲基化组蛋白H3赖氨酸4对调节性T淋巴细胞foxp3基因表达的影响
目的 探讨天然调节性T淋巴细胞(nTreg)的三甲基化组蛋白H3赖氨酸4(H3 K4me3)对foxp3基因的影响,寻找维持调节性T淋巴细胞(Treg)表型长期稳定的方法.方法 使用免疫磁珠细胞(MACS)分选法从健康人外周血中分离出CD4+ CD25+Treg.对CD4+ CD25+ Treg分别进行0d、3d、7d培养,其中0d为阴性对照组,3d为阳性组1,7d为阳性组2,采用流式细胞仪(FCM)对0d、3d、7 d nTreg膜表面标志CD25的变化进行检测,并分别对培养0d、3d、7d的nTreg细胞通过染色质免疫共沉淀(ChIP-PCR)法检测foxp3基因启动子区H3 K4 me3及DNA水平变化.结果 1.使用细胞计数Kit-8(CCK-8)法确定植物血凝素(PHA)质量浓度在10 mg·L-1时为佳的药物质量浓度,对Treg细胞的增殖作用为显著.nTreg细胞培养0d、3d、7d的表型变化呈递减趋势.随着培养时间(0d、3d、7 d)的延长,与foxp3基因启动子区结合的H3 K4 me3表达逐渐减少.2.采用ChIP-PCR法对培养0d、3d、7d的nTreg细胞检测与H3 K4 me3结合的foxp3基因启动子区DNA水平变化.DNA凝胶电泳图显示,0d、3d在204 bp处可见条带(灰度值分别为2.31、0.91),7d有模糊条带或无条带.三者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PHA不能维持Treg细胞的表型稳定,其机制与H3 K4 me3减少有关.
