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MicroRNA-21-5p调控丝裂原活化蛋白激酶p38信号通路
目的 验证microRNA (miR)-21-5p与丝裂原活化蛋白激酶激酶3(MKK3)的靶向调控关系.方法 构建MKK3 3 ' UTR报告载体(MKK3-3U)及突变载体(MKK3-3U-M);化学合成miR-21-5p模拟物(mimics)、miR-21-5p抑制剂(inhibitor)、无意义miR (NC).分别用NC(NC1组)、mimics(mimic1组)、inhibitor(inhibitor1组)与MKK3-3U共转染人胚肾(HEK293)细胞.分别用空载体(NC2组)、MKK3-3U(Wt组)、MKK3-3U-M(Mut组)与mimics共转染HEK293.双荧光素酶检测仪检测细胞荧光比值.予NC(对照组)、mimics(mimic2组)、inhibitor(inhibitor2组)分别干预人肾小管上皮(HK-2)细胞,反转录PCR、Western blot法检测HK-2细胞中MKK3的mRNA及蛋白表达水平.结果 1.NC1组、mimic1组、inhibitor1组荧光比值分别为100.00％、67.99％、133.17％,mimic1组与NC1组比较,差异有统计学意义(t=19.93,P＜0.01).2.NC2组、Mt组、Mut组荧光比值分别为100.00％、65.30％、98.48％,Mt组与NC2组比较,差异有统计学意义(t=14.39,P＜0.01),而Mut组与NC2组间荧光比值差异无统计学意义(t=0.63,P＞0.05).3.对照组、mimic2组、inhibitor2组MKK3 mRNA相对表达量为1.36±0.02、1.01±0.04、1.43±0.06;蛋白质相对表达量为0.97±0.05、0.62±0.06、1.36±0.32,mimic2组较对照组MKK3的mRNA和蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义(F=85.98、118.26,P均＜0.01).结论 MKK3是miR-21-5p的靶基因,miR-21-5p在mRNA和蛋白质水平调控MKK3表达,miR-21-5p可能是调控p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路的重要分子.
