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Pannexin3文献资料
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Pannexin3缝隙连接蛋白在外界冷热刺激下对成牙本质细胞释放三磷酸腺苷的影响
目的 探讨Pannexin3缝隙连接蛋白在外界冷热刺激下对成牙本质细胞释放三磷酸腺苷(ATP)的影响.方法 构建Pannexin3过表达慢病毒转染载体PLL3.7/CMV-PANNEXIN3/CMV-RFP,通过病毒感染获取能够高表达Pannexin3的成牙本质细胞;合成siRNA、构建shRNA分别干扰成牙本质细胞Pannexin3基因表达.采用PCR、Western blot技术对过表达及干扰效果进行评价.将细胞分为对照组、过表达组、siRNA干扰组、shRNA干扰组及甘珀酸(CHX)功能阻断组共五组,对各组细胞分别进行冷热刺激.使用奎纳克林进行染色观察细胞ATP释放情况,通过Image Pro-plus计算荧光变化量,采用生物荧光法对释放到细胞外的ATP含量进行测定.结果 PCR、Western blot及荧光照片结果证明,Pannexin3过表达、siRNA、shRNA能有效感染成牙本质细胞,实现细胞Pannexin3基因的高表达和干扰效果.冷热刺激后成牙本质细胞内的ATP迅速释放到细胞外,Pannexin3过表达细胞释放速度明显高于对照组,使用siRNA、shRNA干扰或者CHX阻断Pannexin3通道都能抑制冷热刺激引起的细胞内ATP释放到胞外.结论 Pannexin3能在成牙本质细胞形成半通道,冷热刺激时细胞通过Pannexin3半通道释放ATP到细胞外.
