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人成肌细胞来源的神经前体细胞移植对大鼠脑梗死的治疗效果及意义
目的 观察成人成肌细胞来源的神经前体细胞移植对大鼠脑梗死的治疗作用,并探讨其意义.方法 从成人正常颞肌分离培养成肌细胞,体外诱导成神经前体细胞.制作大鼠脑梗死模型,并分组:A组移植肌源性神经前体细胞,B组移植成肌细胞,C组为对照组,注射相同体积的PBS.7 d后进行细胞移植.采用肢体放置和感觉刺激试验在细胞移植前1d和移植后1,2,3,4周对大鼠进行运动和感觉功能评分,采用免疫组织化学方法检测移植细胞的微管相关蛋白2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及半乳搪脑苷脂(Galc)的表达变化.结果 细胞移植后2-4周,各组大鼠神经功能评分均有一定程度的提高,A组较B,C组提高明显(P<0.05),B组与C组比较,P> 0.05.大鼠脑内移植细胞至少能存活4周,移植的肌源性神经前体细胞表达MAP一和GFAP.结论 脑梗死大鼠脑内移植成人成肌细胞来源的神经前体细胞后能明显改善其运动和感觉功能.成人成肌细胞取材简单,来源丰富,在体外能够直接诱导为神经前体细胞,其自体移植可以解决免疫排斥问题,且能避免伦理学上的困扰.
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IGF-1 促原代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖与分化的研究
目的 为更好地将成肌细胞应用于组织工程构建,探讨 IGF-1 对原代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖与分化的作用与机制. 方法 通过核素3H-TdR 掺入法测定不同浓度 IGF-1 (1、2、4、8、16 和 32 ng/mL) 作用下成肌细胞的每分钟射线脉冲数(count per minute,CPM) 值,根据浓度 -CPM 值量效曲线确定 IGF-1 促增殖的适宜浓度.在生长培养基中加入该浓度的 IGF-1 用于实验组细胞,对照组细胞仅接受生长培养基.分别观察实验组与对照组生长曲线,比较两组细胞增殖周期的变化.运用流式细胞技术及核素掺入法测定适宜浓度 IGF-1 作用下,成肌细胞增殖周期的变化.另选取不同浓度 IGF-1 (0、5、10、15、20、25、30 ng/mL) 作用于成肌细胞,观察 4d 后成肌细胞融合率,通过融合率-IGF-1浓度-量效曲线确定IGF-1促进成肌细胞融合的佳浓度,并将其用于实验组,而未接受该浓度IGF-1的成肌细胞作为对照组,分别测定两组细胞融合率与磷酸肌酸激酶(creatine kinase,CK) 含量并进行比较. 结果 5 ng/mL 的 IGF-1 为促成肌细胞增殖佳浓度.对照组成肌细胞倍增时间为 96 h;实验组成肌细胞生长曲线左移,倍增时间缩短为 60 h.对照组 DNA G1、S 期与 G2M 期各亚周期所占时间分别是 70.03、25.01 与 0.96 h,实验组为 22.66、16.47 与 20.87 h.实验组与对照组成肌细胞 CPM 峰值出现的时间分别是 48 h 与 96 h,与生长曲线流式细胞技术测定结果一致.IGF-1 促进分化研究显示 20 ng/mL IGF-1 为促成肌细胞分化佳浓度.实验组成肌细胞融合率较对照组提高30%,CK 合成量提高2 000 mU/mL. 结论 IGF-1 对成肌细胞的增殖与分化均具有促进作用,是通过减少G1期成肌细胞数量,增加S期与G2M 期细胞实现的.20 ng/mL IGF-1 能明显增加成肌细胞融合率 CK 合成.
