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GL261细胞文献资料
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HIF-1α慢病毒干扰载体构建及GL261小鼠胶质瘤稳定沉默细胞系的建立
目的 研究短发夹状RNA(shRNA)干扰慢病毒表达载体对小鼠胶质瘤GL261细胞系中乏氧诱导因子-1α(HIF-1 α)基因的沉默效应.方法 构建针对小鼠胶质瘤GL261细胞HIF-1αmRNA的不同干扰靶点的4个shRNA表达载体,筛选出HIF-1 α基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的Oligo DNA,构建pLenti6.3-shR-NA3慢病毒载体感染靶细胞GL261,获得稳定沉默HIF-1α细胞株,利用实时定量PCR和Western blot方法检测稳定细胞株HIF-1α的沉默效应.结果 成功构建了具有HIF-1α沉默效应的慢病毒干扰载体,通过倍比稀释测定干涉病毒滴度为1.15×108TU/mL.实时定量PCR和Western blot实验均证实慢病毒转染后,GL261细胞株中HIF-1α表达水平明显降低.结论 针对HIF-1α基因不同位点的不同shRNA具有干扰效率的差异.特异性的shRNA可稳定地介导HIF-1 α基因沉默.
