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ROCK-I蛋白表达或活性的改变对人卵巢癌细胞运动表型的影响
目的:探讨ROCK-I蛋白表达或活性改变对人卵巢癌细胞运动表型的影响.方法:将ROCK-I的反义寡核苷酸(ASODN)或其显性激活突变体p160Δ3用脂质体介导,转染人卵巢癌细胞系CAOV-3细胞,用RT-PCR与Western blot印迹法检测转染前后ROCK-I和p160Δ3 mRNA和蛋白的表达;rhodamine-phalloidin染色显示ROCK-I ASODN和p160Δ3对细胞骨架的影响;Transwell小室和划痕实验观察ROCK-I表达降低及其活性提高后卵巢癌细胞系CAOV-3运动能力的改变.结果:转染ROCK-I ASODN后,CAOV-3细胞内ROCK-I蛋白的表达明显减少,大抑制率可达49%;转染的p160Δ3在细胞内获得有效表达.转染ROCK-I ASODN后CAOV-3细胞伪足消失,肌动蛋白纤维减少且变得无序,而转染p160Δ3后细胞伪足增多变长,肌动蛋白纤维亦明显增多,且沿细胞长轴分布.伤口愈合实验显示,ROCK-I ASODN明显抑制了CAOV-3细胞的迁移,p160Δ3则显著增强了其迁移能力;转染10μmol/L或20μmol/L ROCK-I ASODN后细胞的随机运动能力分别为其对照组的(72.0±1.3)%和(55.9±2.5)%,定向运动能力分别为其对照组的(72.5±3.4)%和(54.5±1.9)%;转染p160Δ3后,与对照组相比细胞的随机运动能力提高(38.7±1.2)%,定向运动能力提高(40.2±2.6)%.结论:ROCK-I蛋白表达或活性改变与人卵巢癌细胞CAOV-3的运动能力密切相关,ROCK-I可能成为治疗卵巢癌肿瘤细胞转移的新靶点.
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ROCK-Ⅰ蛋白活性变化对卵巢癌细胞恶性表型的影响
目的:探讨ROCK-Ⅰ蛋白活性的改变对卵巢癌细胞恶性表型的影响.方法:将ROCK-Ⅰ的显性激活突变体p160△3以脂质体介导,转染人卵巢癌细胞系SW626、SKOV3、A2780和CaOV-3细胞,采用RT-PCR与Western blot印迹法检测转染前后p160△3 mRNA和蛋白的表达,Boyden小室观察该突变体对4种卵巢癌细胞株侵袭及迁移能力的影响,MTT比色法测定转染前后细胞增殖及粘附能力的变化.结果:转染后,ROCK-Ⅰ的显性激活突变体p160△3在细胞内获得有效表达.转染了p160△3的SW626、SKOV3、A2780和CaOV-3细胞的侵袭能力较各自的对照组分别提高(31.1±6.4)%、(33.0±2.0)%、(24.5±8)%及(39.4±2.8)%;同时四株细胞的随机运动能力较各自的对照组分别提高(31.9±1.0)%、(31.5±1.9)%、(23.0±0.5)%及(38.7±1.2)%,定向运动能力较各自的对照组分别提高(33.9±1.1)%、(33.0±3.6)%;(25.0±3.9)%及(40.2±2.6)%.转染后两株细胞的体外粘附能力及增殖能力均未显示出明显变化.空质粒pCAG-myc转染组与对照组间差异无显著统计学意义(P＞0.05).结论:ROCK-Ⅰ蛋白活性的改变与人卵巢癌细胞的体外侵袭与迁移密切相关,ROCK-Ⅰ蛋白活性的提高明显促进卵巢癌肿瘤细胞的侵袭与迁移.
