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Bcl-2拮抗1文献资料
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靶向Bak1的shRNA表达腺病毒构建及其对人骨肉瘤细胞的影响
目的 构建沉默人Bcl-2拮抗1基因(Bak1)的重组腺病毒,感染人成骨肉瘤细胞MG63并检测其对细胞活性的影响.方法 设计特异性针对Bak1的shRNA序列及无关对照序列scr,分别构建重组腺病毒表达载体,感染人成骨肉瘤细胞MG63,利用qPCR和Western blot检测Bak1基因沉默后的MG63细胞Bak1 mRNA及蛋白的表达,筛选出能高效沉默目标基因的重组腺病毒表达载体,并对其进行包装扩繁,荧光显微镜观察计算病毒滴度,利用MTT法检测高效沉默的重组腺病毒感染MG63细胞后的细胞活性.结果 ①测序列结果表明,shRNA序列已成功克隆入到pAd-GFP载体上;②shRNA-3的沉默效率高,扩增纯化后腺病毒滴度达到7.7×108GFU/ml;③MTT检测显示与NC对照组相比,shRNA-3组MG63细胞活性增强(P<0.5).结论 成功构建了沉默Bak1的重组腺病毒,为进一步研究Bak1的功能奠定了基础.
