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五步蛇毒PCA在心肌缺血再灌注损伤诊断中的实验研究
目的：探讨五步蛇毒蛋白C激活剂（ Protein C activator ，PCA）在心肌缺血再灌注损伤诊断中的应用。方法：SD大鼠随机分成对照组（control，C组）和缺血再灌注损伤组（Ischemia reperfusion injury，IR组），每组15只。 IR大鼠开胸结扎左冠状动脉前降支30 min后再灌注120 min，C组大鼠只穿线而不结扎左冠状动脉前降支；记录大鼠在体心电图及心肌组织学改变。留取血液以制备血浆，检测其活化部分凝血酶时间（ activated partial thromboplastin time ，APTT）；以发色底物法检测血浆蛋白质C （Protein C，PC）活性；酶联免疫吸附法检测血浆游离蛋白质S（plasma free protein S，FPS）的含量。结果：同C组相比，IR组大鼠心肌横纹模糊不清或消失，肌纤维及肌丝明显紊乱且心电图改变明显；IR组大鼠心脏再灌注60 min后血浆APTT明显缩短（ P＜0.05），血浆PC活性缺血期间明显下降，再灌注60 min明显回升，而再灌注120 min又再次下降（ P＜0.01）；血浆FPS含量缺血期间明显减少，再灌注60 min升高，再灌注120 min又减少（ P＜0.05，P＜0.01）。结论：以五步蛇毒PCA制备的血浆蛋白C活性检测试剂可较灵敏地反映心肌缺血再灌注损伤大鼠血浆蛋白C活性的变化。
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蛇毒蛋白C激活剂的活化蛋白C特性及影响因素的探讨
目的:研究蛇毒蛋白C激活剂(PCA-SV)活化蛋白C的特性,探讨可能影响PCA-SV作用的实验条件.方法:分别采用APTT法和CBS02.46发色底物法,研究PCA-SV的作用特点,探讨PCA-SV在不同实验条件下的抗凝活性及酰胺酶活性.结果:PCA-SV是蛋白C特异性激活剂,可特异性地作用于蛋白C,使后者表现抗凝和酰胺酶活性.PCA-SV的适pH值为6.0～7.0,适温度为37～40℃,肝素、枸橼酸钠等抗凝剂及Na+、K+、EDTA等不影响其活性.结论:PCA-SV是一种效价较高、特异性强、影响因素少的蛋白C活化剂.
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五步蛇毒蛋白C激活剂的纯化与活性分析
目的 研究五步蛇毒蛋白C激活剂(PCA)组分的分离纯化及其抗凝活性.方法 借助DEAE-Cellulose、CM-Sephadex C-50和Sephadex C-75柱层析,以离子交换和凝胶过滤法从皖南产五步蛇粗毒中分离纯化PCA组分;以SDS-PAGE凝胶电泳检测其纯度和分子量,发色底物法(Chromogenic Substrate Assay)测定PCA组分的生色反应能力;测定PCA对正常血浆KPTT和PT的影响.结果 从五步蛇粗毒中纯化的PCA组分经SDS-PAGE测定为单一区带,相对分子质量约为18.5 kD,等电点pH 4.9;发色底物法显示其具有生色反应能力;该PCA 1 mg/L在体外明显延长KPTT,但PT不受影响.结论 采用离子交换和凝胶过滤法,可从皖南产五步蛇毒中分离纯化出高纯度的PCA组分,该组分可抑制内凝途径影响血液凝固过程.
