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5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中 MLH-1基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达的影响
目的：探讨甲基化酶抑制剂5′-氮杂-2′-脱氧胞苷（5′-Aza-2′-deoxycytidine）对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1基因甲基化水平、mRNA及蛋白表达的影响。方法：用不同浓度5′-氮杂-2′-脱氧胞苷处理结直肠癌细胞株HT-29和LoVo。应用TaqMan探针为基础的实时定量PCR（Methylight）方法、SYBR Green PCR方法及蛋白印迹实验（Western blot）检测药物处理前后HT-29和LoVo细胞中MLH-1基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果：Methylight检测HT-29细胞株中MLH-1蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转；实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μmol／L 5′-氮杂-2′-脱氧胞苷处理后MLH-1基因mRNA和蛋白表达上调，实时荧光定量PCR检测对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.171±0.126、1.356±0.085和1.422±0.090；在LoVo细胞株相对表达量分别为1.000±0.000、1.117±0.094、1.273±0.062和1.285±0.070。 Western blot检测MLH-1蛋白对照组和不同浓度实验组在HT-29细胞株相对表达量分别为0.114±0.033、0.365±0.040、0.831±0.041和0.849±0.051；LoVo细胞株相对表达量分别为0.602±0.020、0.621±0.028、0.934±0.029和1.057±0.045。以上作用均呈时间、剂量依赖性，MLH-1基因mRNA在HT-29细胞株表达（F=8.918， P=0.010）和LoVo细胞株表达（F=8.351，P=0.011）具有统计学意义。 MLH-1蛋白表达在HT-29细胞株表达（F=226.825， P=0.000）和LoVo细胞株表达（F=153.642，P=0.000）亦具有统计学意义。结论：结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5′-氮杂-2′-脱氧胞苷能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中MLH-1基因的甲基化状态，并能恢复mRNA及蛋白重新表达。
关键词： DNA甲基化 5′-氮杂-2′-脱氧胞苷 Ht-29 Lovo MLH-1基因
