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钙激动剂诱导心肌肥大转录因子的表达
目的探讨不同来源的细胞内游离Ca2+ 浓度([Ca2+]) 在钙神经磷酸酶(CaN)-活化T细胞核因子3(NFAT3) 介导心肌肥大中的作用.方法分别用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或雷诺定(RY)刺激培养的大鼠心肌细胞外Ca2+跨膜内流或细胞内Ca2+释放,检测CaN、NFAT3、锌指转录因子(GATA4)蛋白量以及氚-亮氨酸(3H-Leu)参入量,环孢素A(CsA)作为CaN特异抑制剂.结果 AngⅡ、RY刺激1、3 d,心肌细胞CaN、NFAT3、GATA4蛋白表达及3H-Leu参入量较对照组明显增高(P<0.05或<0.01).CsA可抑制上述作用,与刺激组相比差异有显著性(P<0.05或<0.01).结论刺激心肌细胞Ca2+内流及Ca2+释放,均可激活CaN-NFAT3信号通路.该信号通路的激活与[Ca2+]i增加有关,而与[Ca2+]i的来源无关.CsA能够抑制AngⅡ和RY介导的CaN-NFAT3-GATA4表达的增加和蛋白质合成.
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钙激动剂对心肌肥大有关信号转导的作用
目的探讨钙激动剂对心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)活性,c-fos、c-myc蛋白核转位表达,及蛋白核酸合成的影响.方法应用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ,10-7 mol/L)剌激原代培养的心肌细胞钙内流,雷尼丁(RY,10-7 mol/L)剌激胞内钙释放;剌激5 min时测MAPK活性,免疫组化方法检测剌激5、10、20、30 min时 c-fos、c-myc蛋白定位表达;3H-Leu和3H-TdR掺入法检测剌激24 h心肌细胞蛋白核酸合成.结果 AngⅡ和RY剌激心肌细胞5 min时MAPK活性均明显增高,与对照心肌细胞相比差异显著(P<0.01).免疫组化结果显示,RY剌激心肌细胞c-fos、c-myc蛋白核转位表达早于AngⅡ.AngⅡ和RY剌激24 h,心肌细胞蛋白核酸合成显著增高,与对照组心肌细胞相比差异显著(P<0.01).结论剌激钙内流及钙释放均在早期激活心肌细胞MAPK.钙释放导致的心肌细胞c-fos、c-myc蛋白核转位表达早于钙内流,同时引起心肌细胞蛋白核酸合成明显增加.本研究为通过干预细胞内钙变化来改善心肌肥大提供了实验依据.
关键词： 钙激动剂 丝裂素活化蛋白激酶 c-fos、c-myc 心肌细胞 -
丝裂素活化蛋白激酶参与钙激动剂介导的心肌肥大
目的:探讨不同来源的细胞内钙([Ca2+]i)对心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)介导的心肌细胞肥大反应的作用.方法:以培养的大鼠心肌细胞为模型,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激心肌细胞外Ca2+跨膜内流、三磷酸肌醇(IP3)刺激胞内Ca2+释放,γ-32P-ATP掺入法和免疫印迹(western blot)测MAPK活性及蛋白含量,氚-亮氨酸(3H-Leu)、氚-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入量作为心肌细胞肥大的指标.结果:AngⅡ,IP3刺激15 min均能显著增加心肌细胞MAPK活性及蛋白含量,并提高3H-Leu,3H-TdR掺入量,与对照组心肌细胞相比差异显著(P<0.01).结论:钙激动剂诱导的MAPK活性及含量的增加参与了心肌细胞肥大,心肌细胞的肥大与[Ca2+]i的来源无关.
