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Fok Ⅰ突变文献资料
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维生素D受体基因Fok Ⅰ多态对CYP3A4转录调控的影响
目的:研究人维生素D受体(human vitamin D receptor,hVDR)基因翻译起始密码子Fok Ⅰ突变介导CYP3A4诱导表达的调控能力与野生型比较有无统计学差异.方法:从肝脏组织标本中提取总RNA,RT-PCR法扩增获得野生型hVDR基因cDNA序列,并用定点诱变的方法获得含Fok Ⅰ突变的hVDR cDNA序列,构建野生型和突变型的真核表达载体;同时构建含CYP3A4近端ER6元件的荧光素酶报告基因载体.将hVDR真核表达载体、CYP3A4报告基因载体和内对照载体共同瞬时转染COS-7细胞,转染24 h后用1、10、100 nmol/L的1,25(OH)_2D_3孵育48 h,后裂解细胞分析荧光素酶活性.结果:Fok Ⅰ突变型和野生型hVDR真核表达载体以及CYP3A4荧光素酶报告栽体均构建成功.瞬转后胞内荧光素酶活性检测显示,各浓度1,25(OH)_2D_3孵育后hvDR基因Fok Ⅰ突变型组与野生型组均可激活CYP3A4的转录;但各维生素D_3(vitamin D_3,VD_3)浓度下,突变型组与野生型组的荧光素酶比活性值没有统计学差异.结论:与VD_3结合后,hVDR Fok Ⅰ突变型与野生型均能激活CYP3A4的诱导表达,但与野生型比较,Fok Ⅰ突变不能导致VDR蛋白转录激活调控能力的改变.
