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兔房水来源exosomes的分离与鉴定及其免疫抑制功能的研究
目的:探讨兔房水中是否能够分离得到具有脂质双分子层结构的纳米级小囊泡exosomes,并检测其是否表达免疫抑制相关分子,参与眼球免疫耐受状态的维持.方法:收集40只健康新西兰大白兔的房水,分级分离,超速离心制备exosomes,透视电镜对其形态进行鉴定；Western blot检测exosomes标志性蛋白以及免疫抑制相关分子TGF-β的表达情况；采用CCK-8细胞增殖检测方法判断兔房水来源的exosomes对经ConA诱导的兔子T淋巴细胞增殖情况的抑制功能.结果:40只新西兰大白兔收集到约8 ml的房水,从中获得200μg exosomes.经透射电镜鉴定:从房水中分离获得的exosomes直径主要集中在50～100 nm,具有典型的脂质双分子层结构；Wester blot结果表明,该exosomes表达热休克蛋白Hsp70、四次跨膜蛋白CD9以及内体相关蛋白Alix,不表达内质网蛋白Grp94,具有典型的exosomes蛋白表达谱.此外,该exosomes还表达免疫抑制相关分子TGF-β.体外抑制淋巴细胞增殖实验表明,房水来源的exosomes能够明显抑制T淋巴细胞的增殖.结论:兔房水中能够分离出具有免疫抑制功能的exosomes;该exosomes很有可能参与了眼球免疫耐受的维持.
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TGF-β1对慢性EAE模型C57BL/6小鼠脑和脾脏Foxp3 mRNA表达影响的研究
目的 观察外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对慢性实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)C57BL/6小鼠脑和脾脏Foxp3 mRNA表达目的影响.方法 72只C57BL/6小鼠,随机分为致病组(A组)、干预组(B组)、佐剂对照组(C组)、干预对照组(D组).各组小鼠取发病初、发病高峰和慢性期不同时间点分为1、2、3亚组.用盲法每天观察动物行为活动,称体重并按Benson评分标准做EAE严重性目的临床评估, RT-PCR技术观察各组各期脑和脾组织Foxp3 mRNA目的表达变化.结果 A1～3组平均Benson标准评分分别为2.3±0.4分、3.9±0.5分、3.5±0.4分,B1～3组Benson标准评分2.7±0.4分、4.3±0.5分、2.8±0.5分.A组和B组评分有统计学差异(P＜0.05).D组为假干预组, D1～D3组,平均Benson标准评分分别为2.4±0.5分、4.0±0.4分、3.6±0.3,与A组无统计学差异(P＞0.05),而与B组有统计学差异(P＜0.05).佐剂对照组Benson标准评分为0分.致病组和干预组小鼠脑和脾Foxp3在发病初期表达下降,高峰期下降明显,相比有统计学差异(P<0.05),到慢性期上升,与高峰期相比有统计学差异(P<0.01).假干预组Foxp3各时期表达与致病组无统计学差异(P>0.05),表达变化同致病组.干预组小鼠脑和脾Foxp3表达在发病初期就已下降,但与致病组和假干预组没有统计学差异.在发病高峰期下降较致病组和假干预组明显,并有统计学差异(P<0.05),在慢性期较致病组表达上升,并有统计学差异(P<0.01).结论 外源性TGF-β1对慢性EAE产生较复杂目的影响,高峰期可以使Foxp3表达进一步下调,症状加重,但在慢性期可使Foxp3表达明显上调,从而促进病情缓解.
关键词： 转化生长因子β/药理学 RNA 信使/生物合成 小鼠 近交C57BL
