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Hela细胞/细胞学文献资料
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稳定表达人CD14细胞系Hela-CD14的建立
目的:建立稳定表达人CD14分子的Hela-CD14细胞系,为研究CD14分子及CD14相关性疾病提供研究材料.方法:以人CD14mRNA为模板,通过RT-PCR法扩增CD14基因,T-A克隆后测序核实CD14基因序列.通过EcoR Ⅰ/Xba Ⅰ双酶切和体外连接法将人CD14基因连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,通过转化、克隆得到阳性重组质粒pcDNA 3.1(+)/CD14.将pcDNA 3.1(+)/CD14转染人宫颈癌Hela细胞,经G418筛选、定量PCR (qPCR)和免疫荧光检测CD14基因和蛋白的表达,筛选出稳定表达人CD14阳性的Hela-CD14细胞系.结果:测序显示,扩增到的人CD14基因序列正确,双酶切质粒结果表明,CD14基因成功克隆到pcDNA3.1(+)载体中；免疫荧光结果显示,人CD14主要以膜蛋白形式在Hela细胞上成功表达.结论:本研究建立了稳定的以膜蛋白形式表达人CD14抗原的细胞系Hela-CD14.
