首页 > 文献资料
-
ALK-3、Pax-8基因抑制后大鼠心肌细胞中Smad1/5/8的表达
目的：抑制大鼠胚胎心肌细胞株中ALK-3、Pax-8基因的表达后，探索Smad1/5/8在其中所起的作用。方法：将H9C2（2-1）大鼠胚胎心肌细胞分为4组：针对Pax-8基因的小干扰RNA（Pax-8siRNA）组、ALK-3基因的小干扰RNA（ALK-3siRNA）组、阴性对照（NCsiRNA）组和空白对照组。前3组分别给予相应siRNA（5.0μL）和Lipofectamine2000（5.0μL）配制成的siRNA-脂质体复合物溶液，空白对照组给予等量的细胞培养基。采用qRT-PCR测定Pax-8和ALK-3的mRNA表达，Westernblot法检测磷酸化Smad1/5/8（p-Smad1/5/8）和半胱天冬酶（Caspase）-3表达。结果：与NCsiRNA组和空白对照组比较，Pax-8siRNA组的Pax-8mRNA表达分别下调50%（P＜0.05）和54%（P＜0.05），ALK-3siRNA组的ALK-3mRNA表达分别下调49%（P＜0.05）和53%（P＜0.05），而NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。与NCsiRNA组和空白对照组比较，ALK-3siRNA组p-Smad1/5/8的蛋白表达量分别下调58%（P＜0.05）和55%（P＜0.05），Pax-8siRNA组p-Smad1/5/8的蛋白表达量差异无统计意义（P＞0.05）。NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。与NCsiRNA组和空白对照组比较，Pax-8siRNA组Caspase-3蛋白表达量分别上调76%（P＜0.05）和81%（P＜0.05），ALK-3siRNA组Caspase-3的蛋白表达量分别上调135%（P＜0.05）和140%（P＜0.05），而NCsiRNA组与空白对照组间差异无统计意义（P＞0.05）。结论：在大鼠胚胎心肌细胞株中对基因ALK-3、Pax-8干扰后能引起细胞凋亡蛋白Caspase-3明显增多，并且在ALK-3siRNA组发现Smad1/5/8蛋白磷酸化减少，而Pax-8siRNA组中未发现Smad1/5/8磷酸化减少，提示Smad1/5/8在基因ALK-3被干扰后引起细胞凋亡蛋白Caspase-3增多中起重要作用。
-
丹芪合剂对DM大鼠肾小管BMP-7及其受体表达的影响
目的 观察丹芪合剂和依那普利对糖尿病(DM)大鼠肾小管上皮细胞骨形态发生蛋白-7(BMP-7)及其受体ALK-3表达的影响,探讨丹芪合剂的药理机制.方法 将SD大鼠分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、糖尿病丹芪合剂组(C组)和糖尿病依那普利组(D组).以链脲佐菌素复制DM大鼠模型.于实验12周处死大鼠后测定相应生化指标和肾脏指数,PAS染色观察肾组织的形态结构变化;免疫组化检测肾小管上皮细胞BMP-7和FN蛋白的表达;RT-PCR方法检测肾皮质BMP-7和ALK-3 mRNA水平.结果 ①B组的血糖、甘油三酯和总胆固醇、血肌酐、肾脏指数均显著高于A组并出现明显的蛋白尿,C和D组上述指标除血糖外均明显低于B组.②免疫组化结果显示BMP-7蛋白高表达于A组肾小管上皮细胞胞浆,FN仅有少量表达;B组BMP-7蛋白的表达明显减少,FN表达却明显增多;C和D组肾小管上皮细胞BMP-7蛋白表达显著高于B组,但低于A组,同时FN的表达减少.③RT-PCR结果显示,与A组相比,B组肾皮质BMP-7表达明显减少,且ALK-3 mRNA未见表达,C和D组BMP-7及其受体ALK-3 mRNA表达均显著高于B组,D组ALK-3 mRNA表达甚至高于A组.结论 丹芪合剂和依那普利可能通过促进内源性BMP-7及其受体ALK-3的表达,使FN的沉积减少,从而对糖尿病大鼠肾脏起保护作用.
