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基因载体PEG化壳聚糖的制备及其表征
目的用亲水性的聚乙二醇对壳聚糖进行改性,制备适用于基因转染的非病毒类载体.方法合成步骤共分三步.首先通过有机合成,将甲氧基聚乙二醇(mPEG)的羟基末端依次活化成为羧基和琥珀酰亚胺端基, 形成mPEG-COOH活化物和mPEG-COONSu活化物;然后将亲水性的mPEG-COONSu活化物接枝到壳聚糖的氨基侧链上,得到改性了的壳聚糖-聚乙二醇接枝产物, 应用波谱技术FTIR,1H-NMR,13C-NMR对中间产物和终产物进行了表征.结果在FTIR谱图上基本找到mPEG-COOH,mPEG-COONSu的特征峰;1H-NMR再一次确认mPEG-COONSu的合成;13C-NMR确认了壳聚糖-聚乙二醇接枝产物的存在.结论 mPEG-COONSu活化物通过接枝反应对壳聚糖进行改性,得到了PEG化壳聚糖.
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PPI-DNA复合物的制备和PPI载体的细胞毒性研究
目的研究2.0代聚丙烯亚胺树状物(2.0G PPI)和单甲氧基聚乙二醇(mPEG)的修饰物(PPI-PEG)与DNA的复合物的制备和PPI的细胞毒性.方法用丁二酸酐和琥珀酰亚胺两步活化的mPEG耦联到PPI的氨基上,得到PPI-PEG,应用现代波谱等技术对中间体和终产物进行表征.采用绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP-N1为DNA模型,凝胶点用法研究了PPI和PPI-PEG与DNA的复合,并且采用MTT法测定它们的细胞毒性.结果凝胶电泳数据显示PPI阻滞了DNA在琼脂糖凝胶中电泳,MTT数据显示PPI对细胞具有一定毒性.结论PPI作为基因载体可以与DNA形成复合物,且PPI偶联上PEG后毒性降低.