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肾癌G250抗原蛋白多糖(PG)区蛋白cDNA的克隆和序列测定
目的克隆肾癌G250抗原蛋白多糖(PG)区cDNA,为制备G250杂交瘤及抗G250的单克隆抗体奠定基础.方法从肾癌细胞786-0中提取总RNA,以RT-PCR方法扩增出全长360 bp的G250抗原PG区cDNA,将其与表达载体pCA13连接,转化大肠杆菌JM109,构建G250抗原PG区cDNA克隆.结果酶切及序列分析表明,与GenBank报道的G250抗原PG区cDNA序列完全一致.结论 G250抗原PG区cDNA已成功地得到克隆.
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中药千金子对肾癌细胞株786-0增殖作用的影响及对G250蛋白影响研究
目的 探讨中药千金子对肾癌细胞株786-0增殖作用的影响及对G250蛋白的影响研究.方法 选用肾癌细胞株786-0,分为A组(对照)、B组(5 mg/mL)、C组(10 mg/mL)、D组(20 mg/mL),各组分别采用不同浓度千金子水溶液处理786-0细胞株.MTT比色法检测细胞增殖抑制率,Hoechst33258染色法观察细胞凋亡形态,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期变化,western blot法检测细胞Fas、Caspase3、Caspase7、G250蛋白表达水平,RT-PCR法检测细胞G250 mRNA表达水平.结果 ①各浓度千金子水溶液在24、48、72h对786-0细胞增殖抑制率较高,差异有统计学意义(P<0.05),且浓度越高、作用时间越长,对细胞增殖的抑制作用越强.②B、C、D组细胞核均有明显的凋亡形态学变化.③与A组比较,C、D组细胞凋亡率较高(P<0.05),C、D组G1期细胞比例较高(P<0.05),C、D组S期及G2期细胞比例较低,差异有统计学意义(P<0.05).④与A组比较,B、C、D组Caspase3、Caspase7蛋白表达水平较高(P<0.05),C、D组Fas蛋白表达水平较高,差异均有统计学意义(P<0.05).⑤与A组比较,B、C、D组G250 mRNA及G250蛋白表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 中药千金子对肾癌细胞株786-0增殖有明显的抑制作用,其机制为上调G250抗原及Fas、Caspase3、Caspase7蛋白表达,促进细胞发生G1期阻滞,引起786-0细胞凋亡.
关键词： 千金子 肾癌细胞株786-0 细胞增殖 细胞周期 G250抗原
