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人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库的筛选与鉴定
目的 从已构建的人源性抗血小板膜糖蛋白(glycoprotein,GP)Ⅱb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库中筛选人源性抗血小板膜GPⅡb/Ⅲa Fab抗体,并对特异性阳性克隆进行鉴定.方法 以表达GPⅡb/Ⅲa的CHO123细胞包板,对人源性抗血小板膜GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,采用细胞ELISA法筛选特异性阳性克隆,用Western blot法鉴定表达蛋白与GPⅡb/Ⅲa结合的特异性,将阳性克隆进行扩增、测序.结果 以CHO123细胞富集淘筛3轮,并用ELISA法检测到2个高亲合力的特异性识别血小板膜GPⅡb/Ⅲa的克隆,Western blot鉴定结果显示在阳性克隆的培养上清和细菌冻融上清均有特异性条带出现.对核苷酸序列进行同源性分析,证实这两个克隆轻链基因与人免疫球蛋白K轻链的同源性分别高达97%和98%,重链基因与人免疫球蛋白Fd段的同源性分别高达94%和93%.结论 利用噬菌体抗体库技术,成功地从人源性抗血小板膜GPⅡb/Ⅲa Fab抗体库中筛选出抗血小板膜GPⅡb/Ⅲa的特异性阳性克隆,该克隆具有较高的特异性,其克隆基因符合抗体可变区结构特点.
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射频消融术前后血栓前状态标志物的变化
目的:通过测定接受导管射频消融术(RFCA)的患者其血栓前状态敏感标志物CD62P、Ⅱb/Ⅲa、凝血酶原时间(PT)、血浆凝血因子Ⅰ(FIB)水平的改变,探讨 RFCA与血栓前状态的关系及相应的干预措施,以便减少 RFCA后血栓并发症的出现.方法:设健康对照组20例. 接受 RFCA治疗的67例房室结折返性心动过速患者(RFCA组)随机分为2亚组,其中肝素亚组为29例,非肝素亚组38例 .2亚组共采静脉血5次:静脉鞘置入即刻①、心内电生理检查后②、射频消融完成即刻③、术后24 h④、术后48 h⑤; ①、②、③、④、⑤时间点检测CD62P、Ⅱb/Ⅲa,在①、④时间点检测PT、血浆FIB水平.结果:实验组CD62P、Ⅱb/Ⅲa在 RFCA后即刻与术前比较有显著性增高(P＜0.05);术后24 h接近术前水平(P＞0.05),仍高于对照组(P＜0.05),术后48 h与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).肝素亚组与非肝素亚组CD62P、Ⅱb/Ⅲa在术前、术后比较差异无统计学意义(P＞0.05);PT、血浆FIB水平术后24 h与术前比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:RFCA可引起血栓前状态,肝素亚组与非肝亚素组血小板活化表达差异无统计学意义.PT、FIB不如CD62P、Ⅱb/Ⅲa敏感.
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血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa拮抗剂临床应用的研究进展
血小板在动脉血栓形成中起着重要的作用.血小板在受到各种刺激后引起活化,产生血小板聚集,导致血栓形成,并常成为致命的因素之一.
