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人泛素样修饰子(hUBL)文献资料
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表达人泛素样修饰子基因细胞株的构建及其鉴定
目的:构建人泛素样修饰子(hUBL)基因的逆转录病毒载体并转染293T细胞,以探讨其生物学功能.方法:将hUBL克隆到原核表达质粒PET28a中,构建重组质粒PET28a-hUBL,转化BL21菌,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.用其纯化蛋白免疫小鼠,获得多克隆抗体.重组蛋白用Western blot鉴定.将hUBL基因克隆到逆转录病毒质粒中并转染293T细胞,用免疫组化染色法鉴定hUBL基因的表达.结果:hUBL在大肠杆菌中获得高效表达,并纯化了hUBL-PET28a的融合蛋白,以此为抗原制备了高效价的抗hUBL蛋白的小鼠多克隆抗体.免疫组化染色表明,hUBL重组逆转录质粒可在293T细胞中高效表达hUBL蛋白.结论:成功地构建了hUBL重组逆转录病毒载体,使得其在293T细胞中表达,获得稳定表达的细胞株.
关键词： 人泛素样修饰子(hUBL) 基因克隆 蛋白表达 逆转录病毒载体 293T细胞
