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胰岛因子1文献资料
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人胰岛因子1基因启动子的克隆及活性鉴定
目的:克隆含人胰岛因子1 (islet1,ISL1)基因上游启动子序列的质粒并检测其在人胚肾HEK-293细胞中的启动子活性.方法:以HEK-293细胞提取的DNA为模板,PCR扩增ISL1基因启动子区全长1 419 bp片段;酶切后将此片段连接至pGL3-Basic载体,克隆含有ISL1基因启动子片段的重组质粒;以此重组质粒为模板重复上述步骤构建一系列ISL1启动子5'侧翼区截短质粒.将含ISL1启动子序列的重组质粒及其截短质粒转染至人胚肾HEK-293细胞,双荧光素酶报告基因检测各片段的启动子活性,找出启动子小活性区域,并通过生物信息学方法分析转录因子结合位点.结果:经酶切、测序鉴定,成功构建含有ISL1启动子序列的重组质粒及其截短质粒.与pGL3-Basic空载体相比,含有ISL1启动子序列的重组质粒启动子活性明显增加(P＜0.01).ISL1小活性区域位于转录起始位点-173 bp至-1 bp之间,其中包含OCT-1、MYOD、E2F2等多个转录因子结合位点.结论:人ISL1转录起始点上游1 215 bp区域在HEK-293细胞中具有较强启动子活性.
