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端粒酶调节相关基因文献资料
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靶向端粒酶调节相关基因TRAP siRNA表达载体的构建
目的: 构建靶向端粒酶调节相关基因TRAP的siRNA 表达载体.方法: 根据siRNA设计原则,设计并化学合成2段编码短发夹RNA序列、靶向端粒酶调节相关基因TRAP的寡核苷酸,各64个碱基,退火,克隆到线性化的pSilencerTM2.1-u6 neo质粒U6启动子下游重组构建RNAi质粒.结果: 重组质粒pSilencerTM2.1-u6 neo-TRAP经过插入片段基因序列分析,结果表明64个碱基成功插入到预定位子,并且序列完全一致.结论: 成功构建靶向TRAP基因的siRNA表达载体,为进一步研究TRAP在调控hTERT的表达、降低端粒酶活性和肿瘤的基因治疗方面的作用做了基础.
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稳定转染ShRNA-TRAP对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响
目的 探讨稳定转染靶向端粒酶调节相关基因TRAP的小发夹RNA对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响.方法 构建特异性作用于TRAP mRNA的小发夹RNA质粒表达载体,转入SGC-7901细胞.,筛选的阳性克隆细胞继续压力培养3个月,采用RT-PCR法检测TRAP mRNA的表达,MTT法检测细胞生长,同时检测细胞凋亡、hTERT mRNA、端粒酶活性.结果 稳定转染ShRNA-TRAP后,SGC-7901细胞的TRAP mRNA表达明显下降,hTERT mRNA和端粒酶活性降低;细胞增殖能力降低,细胞凋亡率增加.结论 ShRNA-TRAP能长效的抑制TRAP mRNA的表达,下调hTERT mRNA转录及端粒酶活性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,可作为抑制端粒酶的肿瘤基因治疗策略的补充.
