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CPU86017及其手性异构体CPU86017-RS对异丙肾上腺素引起心肌细胞中FKBP12.6和SERCA2a下调的改善作用
目的:探讨对氯苄基四氢小檗碱类化合物CPU86017及其手性异构体CPU86017-RS对异丙肾上腺素(ISO)引起心肌细胞中FKBP12.6和SERCA2a异常表达的改善作用.方法:将原代培养72小时的SD乳鼠心肌细胞随机分为9组:正常组,ISO组,普萘洛尔(10-6 mol·L-1)组,CPU86017低、中、高剂量组(剂量分别为10-7、10-6、10-5 mol·L-1)及CPU86017-RS低、中、高剂量组(剂量分别为10-7、10-6、10-5 mol·L-1),除正常组外,在其余各组的培养基中均另加ISO,使其浓度为10-6 mol·L-1.继续培养24小时后,用RT-PCR和Western Blot法分别测定各组 FKBP12.6 和SERCA2a 的mRNA及蛋白表达水平.结果:与正常组相比,ISO组FKBP12.6 和SERCA2a的mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.01).不同浓度的CPU86017和CPU86017-RS均呈剂量依赖性地逆转ISO引起的FKBP12.6 和SERCA2a的下调,且CPU86017-RS的作用强于CPU86017(P<0.05,P<0.01).结论:CPU86017和CPU86017-RS对ISO诱导的心肌细胞FKBP12.6和SERCA2a异常表达具有改善作用.
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FK506结合蛋白12.6通过钙调蛋白依赖通路促成失血性休克大鼠早期血管高反应性形成
目的 观察失血性休克早期大鼠肠系膜上动脉平滑肌FK506结合蛋白12.6(FKBP12.6)是否参与对失血性休克血管反应性的调节及可能的信号通路.方法 采用SD大鼠(雌雄各半,体质量200～220g)建立失血性休克[40 mmHg(1 mmHg =0.133 kPa)]早期(30min)及晚期(2 h)模型;采用离体器官张力测定技术检测失血性休克后不同时相大鼠肠系膜上动脉主干对缩血管物质去甲肾上腺素(NE)的收缩反应性;采用Western blot技术检测失血性休克不同时相大鼠肠系膜上动脉平滑肌钙调蛋白(CaM)的表达及其分布;采用免疫共沉淀联合Western blot技术检测CaM-雷诺定受体2(RyR2)复合子形成.结果 在失血性休克早期CaM从肌浆网RyR2解离,肌球蛋白轻链20(MLC20)磷酸化明显升高且呈钙/钙调蛋白依赖激酶Ⅱ(CaMKⅡ)依赖性(P＜0.01),外周血管对NE的收缩反应性显著增强,NE累积量-效曲线明显左移,1×10-5 mol/L NE诱导大收缩(Emax)由(0.79±0.08)g升至(1.05±0.12) g(P＜0.05);外源性重组FKBP12.6可明显抑制CaM从RyR2解离,抑制休克早期MLC20磷酸化及外周阻力血管对NE的收缩反应性,表现为NE累积量-效曲线明显右移,1×10-5 mol/L NE诱导大收缩(Emax)由(1.05±0.12)g降至(0.58±0.08) g(P ＜0.05).结论 FKBP12.6通过耦联CaM通路参与失血性休克早期血管高反应性的形成.
关键词： 失血性休克 血管反应性 FK506结合蛋白12.6 钙调蛋白 -
失血性休克不同时相FK506结合蛋白12.6的转位及其与血管反应性变化的相关分析
目的 观察失血性休克后不同时期大鼠肠系膜上动脉平滑肌FK506结合蛋白12.6(FKBP12.6)的表达及其分布,检测休克不同时相大鼠肠系膜上动脉血管反应性的变化,探讨FKBP12.6是否参与对失血性休克血管反应性的调节.方法 建立大鼠失血性休克[40 mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa)]早期(30 min)及晚期(2 h)模型；采用离体器官张力测定技术检测失血性休克后不同时相大鼠肠系膜上动脉主干对缩血管物质去甲肾上腺素(NE)的收缩反应性；采用Western blot法检测失血性休克不同时相大鼠肠系膜上动脉平滑肌FKBP12.6的表达及其分布；采用免疫共沉淀联合免疫杂交检测FKBP12.6-雷诺定敏感受体2(RyR2)复合子形成.结果 失血性休克早期(30 min),大鼠肠系膜上动脉对NE的收缩反应性明显提高,大收缩力(Emax)由(0.70 ±0.18)g升至(1.03±0.31)g(P ＜0.05),而在休克晚期(2 h)大鼠肠系膜上动脉对NE的收缩反应性明显降低,Emax由(0.70 ±0.18)g降至(0.54±0.12) g(P＜0.05),提示在失血性休克不同时相,大鼠肠系膜上动脉对NE具有“双相”反应性；失血性休克后30 min及2h,大鼠肠系膜上动脉血管平滑肌FKBP12.6总蛋白的表达无明显变化,但在失血性休克早期,FKBP12.6在胞质内的表达明显增强,在质膜上的表达明显降低；在休克晚期,FKBP12.6在胞质内的表达降低而在质膜的表达升高；免疫共沉淀结果可见,在失血性休克30 min,大鼠肠系膜上动脉平滑肌FKBP12.6-RyR2复合子的形成明显减少,而在休克晚期FKBP12.6-RyR2复合子的形成较正常对照比较无明显改变；相关分析显示,失血性休克早期FKBP12.6在胞质内的表达增强与休克早期血管高反应性呈显著正相关(r =0.993,P＜0.01).结论 在失血性休克不同时相,大鼠肠系膜上动脉平滑肌FKBP12.6存在胞质/质膜的转位,在休克早期FKBP12.6从RyR2的解离,至少部分促成失血性休克早期大鼠肠系膜上动脉对NE高反应性的形成.
关键词： 失血性休克 血管反应性 FK506结合蛋白12.6 雷诺定敏感受体2
