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SOD-TATPTD融合蛋白文献资料
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hCu,Zn-SOD-TAT PTD的融合表达及其跨膜转运性质的初步研究
HIV-I反式激活蛋白TAT中的一段富含碱性氨基酸的短序列具有独特的跨膜转运能力,被称为TAT蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD).从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu,Zn-SOD基因,插入pUC19测序;以测序质粒为模板,再用含TAT PTD编码序列的3'引物PCR扩增得hCu,Zn-SOD-TATPTD融合基因,并插入pUC19.将SOD基因和SOD-TAT PTD融合基因分别亚克隆至温控表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α.SDS-PAGE和Western blot结果表明,热击诱导4h后,分别在19 ku和22 ku处出现SOD和SOD-TAT PTID目标表达条带,表达蛋白以包含体形式存在.分别提取SOD和SOD-TAT PTD包含体,复性纯化后SOD和SOD-PTD重组蛋白均具有特异的SOD酶活性,其比活性分别为12×103 NU/mg和9.9×103 NU/mg.细胞试验结果表明,与SOD相比较,SOD-TAT PTD融合蛋白能显著提高细胞内SOD酶活力.
关键词： SOD-TATPTD融合蛋白 原核表达 蛋白转导
