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重组鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子文献资料
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鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的纯化和复性研究
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种造血生长因子和促炎细胞因子.重组鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在抗肿瘤及抗炎研究中有着极其重要的作用.以NcoⅠ和BamHⅠ为酶切位点将mGM-CSF编码序列插入到pET-28a载体中.转染E coli宿主菌BL21后得到以包涵体形式表达的蛋白,表达量占菌体总蛋白量51.6％.包涵体的纯化条件在实验中进一步优化,然后溶解于8 mol/L尿素中.采用稀释法在2 mol/L尿素缓冲液中添加PEG对蛋白进行复性.复性后的产物经过离子交换层析纯化后得到高纯度的有活性的mGM-CSF.通过体内白细胞计数和体外髓样细胞增殖检测表明纯化的蛋白具有mGM-CSF全部的生物活性.这种制备方法能够从每升发酵液中获得8.06 mg蛋白,具有蛋白表达量高,复性和纯化方法简便易得的特点,适用于规模生产.
