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高效疏水色谱分离不同龋敏感者唾液α-淀粉酶
目的采用疏水色谱技术分离提纯高龋者和无龋者腮腺液α-淀粉酶的方法,研究人唾液α-淀粉酶与龋病的关系.方法样品为刺激性唾液,冻干样品配成20g/L的浓度.以2.0 mol/L(NH4)2SO4和0.02 mol/L KH2P04溶液分别为A、B流动相,过XDF-SGM型疏水柱,25 min梯度,A:100%～0%、B:0%～100%,于230 him检测,收集所得6个组分峰,对硝基麦芽糖庚酰(PNPG7)限定底物法测定酶活性,SDS-PAGE电泳测定其分子质量对样品进行定性.结果经酶活性检测,6号峰被证实为有高的淀粉酶活性,α-淀粉酶的平均出峰时间标准差小,个体间重复性好;高龋和无龋者峰面积百分比差异有显著性(P＜0.05).结论α-淀粉酶与龋病有一定的相关性.
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可溶型人干细胞因子cDNA的克隆表达、复性与纯化
目的:构建可溶型人干细胞因子(hSCF)基因的表达载体.优化培养条件,实现hSCF基因在大肠杆菌中的高表达.方法:利用PCR技术,以人淋巴结cDNA为模板扩增并克隆hSCF基因.用简并PCR对hSCF基因5′端的序列进行修饰,以实现在大肠杆菌中的高效表达;用MTY比色法测定初步复性和纯化的hSCF蛋白的生物学活性.结果:扩增并克隆了hSCF成熟肽cDNA.将其插入表达载体pBV220构建了hSCF基因的表达质粒,并在大肠菌中初步表达.表达量占总菌体的20%以上,优化培养条件后表达量可达到40%以上,表达产物为包涵体.将包涵体溶解在8 mol/L脲或7 mol/L盐酸胍中,用疏水色谱法进行复性并同时纯化,得到具有天然生物学活性的rhSCF蛋白.结论:成功地克隆hSCF基因,并实现在原核系统中的高表达,所获表达菌株可用于生产以获得具有生物学活性的rhSCF蛋白产品.
