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钙调激酶Ⅱ抑制剂在异动症发生中的分子机制研究
目的 探讨钙调激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂在异动症发生中的分子机制.方法 采用6-羟多巴胺立体定向注射至小鼠右侧内侧前脑束制备偏侧帕金森病(PD)小鼠模型,将造模成功的PD小鼠分为PD组(n=11)、KN-92组(n=11)和KN-93组(n=11),并设假手术组(n=10)(在相同部位注射生理盐水作为对照).KN-92组和KN-93组给予左旋多巴(15 mg/kg)和苄丝肼(12 mg/kg)腹腔注射,假手术组及PD组注射等量的生理盐水,1次/d,持续14 d.在第11 d、12 d左旋多巴给药前,KN-92组纹状体给予KN-92处理,KN-93组纹状体给予K-93处理(2μl,浓度0.1μg/μl),假手术组及PD组给予等量生理盐水处理.在给药的第1d、3d、5d、8d、10d、13d行异常不自主运动(AIM)评分.在给药的第4d、9d、14d行左前肢使用率的评价.采用Western blot法检测损伤侧纹状体区环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、多巴胺和环磷腺苷调节的磷酸化蛋白-32(DARPP-32)及其磷酸化水平变化情况.结果 假手术组治疗前后左前肢使用率差异无统计学意义.PD组给药后左前肢使用率逐渐下降,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.01),KN-92组和KN-93组给药后左前肢使用率逐渐升高,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.01).PD组、KN-92组和KN-93组给药前左前肢使用率两两比较差异无统计学意义.PD组、KN-92组和KN-93组小鼠治疗前及治疗第4 d、9 d左前肢使用率均显著低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.01),PD组、KN-92组治疗第14 d左前肢使用率均低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.01),KN-93组治疗第14 d左前肢使用率与假手术组比较差异无统计学意义.与PD组比较,KN-92组治疗第4 d、9 d、14 d及KN-93组治疗第4 d、9 d左前肢使用率显著升高(均P<0.01).与KN-92组比较,KN-93组第14 d左前肢使用率显著升高(P<0.01).KN-93组、KN-92组小鼠治疗后第1 d、3 d、5 d、8 d、10 d AIM评分呈现逐渐增高趋势,两两比较差异有统计学意义(均P<0.01).治疗后第14 d,KN-93组AIM评分明显低于KN-92组(P<0.01),治疗后第1 d、3 d、5 d、8 d、10 d,KN-93组AIM评分与KN-92组差异无统计学意义.与假手术组比较,PD组及KN-93组p-DARPP-32及p-CREB水平显著降低(均P<0.01),KN-92组p-DARPP-32及p-CREB水平显著升高(均P<0.01).与PD组比较,KN-92组p-DARPP-32及p-CREB水平显著升高(均P<0.01),KN-93组比较差异无统计学意义.KN-93组p-DARPP-32及p-CREB水平明显低于KN-92组(均P<0.01).结论 左旋多巴诱发的异动症可能与CaMKⅡ有关,其抑制剂KN-93可能是治疗PD引发的运动并发症的一种新的治疗方式.
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钙调激酶Ⅱ参与帕金森病运动并发症发病机制的实验研究
目的：观察钙调激酶Ⅱ（ CaMKⅡ）抑制剂KN－93对帕金森病（ PD）小鼠运动症状及异动症发生的影响并探讨其机制。方法将6－羟基多巴立体定向注射于小鼠纹状体制备PD小鼠模型，将造模成功的PD小鼠随机分为PD组、KN－92组和KN－93组，并设假手术组，每组16只。 KN－92组和KN－93组给予左旋多巴（15 mg／kg）和苄丝肼（12 mg／kg）腹腔注射，假手术组及PD组腹腔注射等量生理盐水，每天1次，持续14天。在第111、2天左旋多巴注射前，KN－92组给予KN－92处理，KN－93组给予KN－93处理（2μl，浓度0．1 g／L），假手术组及PD组给予等量生理盐水。于左旋多巴给药的第1、3、5、8、10、13天对各组大鼠进行异常不自主运动（ AIM）评分，并于第0、4、9、14天进行圆柱体实验评分。此外，采用Western blot法检测纹状体区CaMKⅡ及 PKA磷酸化水平。结果随左旋多巴治疗时间的延长，大鼠AIM评分逐渐升高，给予KN－93处理后，AIM评分则明显下降（ P＜0．01）；圆柱体实验提示给予左旋多巴后，KN－93组、KN－92组左前肢使用率较PD组明显升高（均P＜0．01）。 Western blot结果显示PD组及KN－92组CaMKⅡ及PKA磷酸化水平较假手术组明显升高（均P＜0．01），KN－93组CaMKⅡ及PKA 磷酸化水平较KN－92组明显降低（均P＜0．01）。结论 CaMKⅡ抑制剂KN－93可以减少PD小鼠异动症的发生而不影响左旋多巴的抗帕金森病作用。其机制可能是通过抑制PKA信号通路从而减少异动症的发生，提示抑制CaMKⅡ信号可能有助于减少PD小鼠异动症的发生。
