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1例ABw19亚型的血型分子机制分析
目的 对1例ABw19亚型的血型分子机制进行研究.方法 对1例ABO血型正反定型不符患者的血型通过基因测序等方法研究其分子机制.结果 该患者血型鉴定为比较少见的ABw19亚型,该亚型是由于ABO血型基因第7外显子存在646T/A杂合,导致F216I氨基酸改变所致.结论 ABO血型基因646T ＞A突变可能是导致ABw19亚型的分子遗传基础之一.
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ABO血型基因编码区全长序列的研究及初步应用
[目的]研究ABO血型基因编码区全长序列及对疑难标本的初步应用.[方法]对6份已知ABO血型的血样进行DNA抽提.针对ABO基因启动子、所有外显子、部分内含子序列设计、合成一系列特异性引物,探索它的佳PCR反应体系和扩增条件.获得的PCR产物直接进行序列测定.用建立的方法对2份ABO疑难血型的标本进行全长序列测定.[结果]得到ABO基因中A101、B、O01、O02、A102常见等位基因的ABO基因编码区全长核苷酸序列.疑难标本中:正定型为O型、反定型为B型的ABO基因定为O02/O21型;表型为0型的基因定为A102/O01型.[结论]建立起中国人群的ABO基因编码区全长标准序列信息库,并可运用于ABO疑难血型基因的研究中.
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ABO血型基因及亚型真核表达载体的构建及鉴定
目的 构建人ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体,为研究ABO血型基因及亚型基因的功能奠定基础.方法 从已知ABO基因分型的标本中(A101,B101)提取总RNA,将其逆转录合成cDNA,经特异性引物扩增目的基因片段,将其定向连接到pcDNA3.1(+)真核表达载体;采用定点突变PCR的方法构建CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体,通过测序鉴定其序列正确.将ABO血型A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体分别转染Hela细胞系,通过免疫荧光和Western印迹检测各ABO基因在细胞中的表达.结果 测序结果显示扩增到的A101及B101 cDNA以正确序列和方式插入载体,CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型真核表达载体的测序结果显示相应位点均成功突变;免疫荧光和Western印迹结果显示A101、B101及其CisAB01、Ael05、B(A)04和Bw03亚型在Hela细胞中均有表达.结论 成功构建了ABO血型基因及亚型基因真核表达载体,体外转染Hela细胞成功表达糖基转移酶,为后续研究奠定了基础.
