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水杨酸钠对大鼠耳蜗螺旋神经节神经元的毒性研究:多巴胺受体介导NMDA受体与GABAA受体的表达
本研究旨在观察多巴胺受体(dopamine receptor,DR)是否参与水杨酸钠(sodium salicylate,ss)对大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neuron,SGN) N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)和A型γ-氨基丁酸受体(γ-aminobutyric acid type A receptor,GABAAR)亚单位蛋白表达的作用.原代培养大鼠SGN,用免疫荧光技术检测SGN上第一家族多巴胺受体(DR1)和第二家族多巴胺受体(DR2)的表达;分别用5 mmol/L SS、SS+ DR1拮抗剂(SCH23390,20 μmol/L)和SS+DR2拮抗剂(Eticlopride,20 μmol/L)处理SGN后,用Western blot检测NMDA受体NR1亚单位、GABAA受体α2亚单位(GABAA receptor subunit α2,GABRα2)蛋白的表达.结果显示,SGN的胞体与突起均有DR1、DR2表达;SS可下调GABRα2和NR1的膜蛋白表达,但不影响二者的总蛋白表达:SCH23390和Eticlopride均能逆转SS对GABRα2和NR1膜蛋白表达的下调作用.以上结果提示,SS可影响SGN表面GABAAR和NMDAR的转运,其作用机制涉及DR的介导作用.
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水杨酸钠影响耳蜗螺旋神经节神经元GABAa受体亚单位的表达
目的:观察大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)中GABAa受体亚单位的基因表达水平,探讨水杨酸钠对SGN的GABAa受体亚单位表达的影响.方法:应用实时荧光定量PCR技术,检测新生SD大鼠SGN和大脑皮层GABAa受体12个亚单位的表达;观察水杨酸钠5 mmol/L处理15 min、30 min、1h、3h和6h后的不同时间段原代培养SGN的GABAa受体亚单位的表达.结果:①SGN有GABAa受体α1-6、β1-3、γ1-3亚单位的表达,各亚单位的表达量均低于大脑皮层(P＜0.05).在SGN的α亚单位族中,表达量:α2＞ α3/α5＞α4＞α1＞α6,α3和α5表达量差异无统计学意义(P＞0.05);β亚单位族表达量:β3＞β2＞β;γ亚单位族表达量:γ1＞γ2＞γ3.②水杨酸钠作用后,除α5外,各时间点亚单位表达量都有明显变化.其中15 min时α1、α2、β1、γ1-3表达量升高,而α3表达量降低(P＜0.05);30 min时,α3、β1、β3表达量升高,而γ1表达量降低(P＜0.05);1 h时,β2表达量升高而γ3表达降低(P＜0.05);3 h时,β1、β2表达量升高,而α3、γ2表达量降低(P＜0.05);6 h时,α1、α3、β2、β3、γ1表达量升高,而α2、α4、β1表达量降低(P＜0.05).结论:大鼠SGN上有GABAa受体α1-6、β1-3、γ13的表达,其亚单位的表达量均低于大脑皮层.水杨酸钠可导致SGN的GABAa受体亚单位表达量改变,在早期(15min)时,大部分亚单位表达为明显升高,其后在正常值上下低水平波动.
关键词： 水杨酸钠 GABAA受体 耳蜗螺旋神经节神经元 实时荧光定量PCR -
水杨酸钠通过DA受体影响耳蜗螺旋神经节神经元NMDA受体与GABAa受体亚单位的表达
目的:观察水杨酸钠(SS)对大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)的多巴胺受体(DR)亚型表达的影响,以及观察SS作用下,DR对SGN的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体和γ-氨基丁酸(GABA)a受体亚单位的影响,探讨SS介导的受体之间的相互作用.方法:应用免疫荧光技术,检测新生SD大鼠SGN中DR两家族DR1、DR2的表达;应用RT-PCR技术,检测SS处理后的SGN中DR1和DR2亚型的mRNA变化,观察在激活和抑制DR活动时SS对SGN的NMDA受体亚单位NR1、GABAa受体亚单位GABRα2的mRNA表达的影响.结果:免疫荧光显示:在SGN的胞体与突起均有DR1、DR2的免疫荧光显示.RT-PCR结果显示:①SGN有DR亚型(DRd1～DRd5)、GABRα2、NR1的表达;②5 mmol/L SS作用SGN 30 min后,除DRd3外,其余DR亚型及GABRα2、NR1的mRNA表达量均明显升高,其中DRd1表达增加34.64％(t=-5.123,P=0.007);DRd2表达增加34.60％(t=-5.206,P=0.006);DRd4表达增加20.87％(t=-3.337,P=0.029);DRd5表达增加26.42％(t=-6.054,P=0.004);GABRα2表达增加30.41％ (t=-2.839,P=0.047);NR1表达增加39.22％(t=-6.243,P=0.003);③SS分别与多巴胺(100 μmol/L)、DR1激动剂(SKF38393,20 μmol/L)、DR2激动剂(Quinpirole,20 μ.mol/L)分别作用SGN 30 min后,GABRα2、NR1的mRNA表达量均明显升高,其中,GABRα2表达分别增加21.78％、27.45％、33.02％、33.42％ (F=12.399,P=0.001),NR1表达分别增加28.70％、26.82％、29.03％、35.05％(F=50.395,P=0.000);④SS+ DR1拮抗剂(SCH23390,20 μmol/L)、SS+ DR2拮抗剂(Eticlopride,20 μmol/L)分别作用SGN 30 min后,与单独SS作用相比,GABRα2的mRNA表达分别减少29.56％、37.10％(F=22.101,P=0.000),NR1的mRNA表达分别减少37.62％、32.83％(F=72.933,P=0.000).结论:SS可诱导SGN的大部分DR亚型的mRNA表达明显升高;SS可能通过DR影响SGN上GABAaR、NMDAR的mRNA表达.
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补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元5-HT1B、2C受体表达的影响
目的 探讨补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGN)中5羟色胺(serotonin,5-HT) 1B、2C受体的表达及意义.方法 60只健康SPF级雄性大鼠随机分为正常组10只(生理盐水组),耳鸣模型组50只(采用水杨酸钠腹腔注射联合“饮水抑制”大鼠行为学实验方法建立大鼠耳鸣模型),耳鸣模型组造模成功后再分为水杨酸钠组10只、中药组30只(补肾活血化痰开窍方低、中、高剂量组各10只)、西药组(卡马西平组)10只,除水杨酸钠组给予生理盐水灌胃外,各组给予相应药物干预8周,造模成功后运用免疫组化法检测各组耳蜗SGN中5-HT1B、2C受体的表达.结果 耳鸣造模成功并给予相应药物干预8周后,各组大鼠耳蜗SGN中均有5-HT1B、2C受体的表达,与生理盐水组相比,水杨酸钠组中5-HT1B表达减少,5-HT2C表达明显增多;与水杨酸钠组相比,中药各剂量组耳蜗SGN中5-HT1B表达增多,2C表达均明显降低.结论 耳鸣大鼠耳蜗SGN中的5-HT1B受体表达减少、5-HT2C表达增加,应用补肾活血化痰开窍方后5-HT1B表达增多而5H2C表达降低,产生了拮抗作用,该方可能应用于耳鸣的治疗.
关键词： 补肾活血化痰开窍方 耳蜗螺旋神经节神经元 5羟色胺1B、2C受体 耳鸣 -
补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元NMDA受体亚型表达的影响
[目的]观察补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚型1、2A、2B(NR1、NR2A、NR2B)表达的影响,并探讨其作用机制,以期为临床应用补肾活血化痰开窍方治疗耳鸣提供实验依据.[方法]将60只大鼠随机分为正常组,模型组,中药低、中、高剂量组,西药组6组,每组10只.采用大鼠腹腔注射水杨酸钠联合"饮水抑制"法建立大鼠耳鸣模型.造模成功后,中药低、中、高剂量组给予补肾活血化痰开窍方(剂量分别为5.5、11、22 g·kg-1·d-1)灌胃,西药组给予卡马西平(剂量为5 mg·kg-1·d-1)灌胃,模型组和正常组给予2 mL生理盐水灌胃,每天1次,连续治疗8周.采用免疫印迹法和实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测其耳蜗SGN中NR1、NR2A、NR2B在耳鸣大鼠的表达情况.[结果]与正常组比较,模型组NR1、NR2A、NR2B在模型组中表达升高,差异具有统计学意义(均P<0.05);与模型组比较,中药各剂量组耳蜗SGN中NR1、NR2A、NR2B的表达均明显降低(均P<0.05).[结论]补肾活血化痰开窍方可有效缓解大鼠耳鸣,其机制可能与降低耳鸣大鼠耳蜗SGN中增高的NMDA受体亚型NR1、NR2A、NR2B表达有关.
