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一种非Piezo依赖的高卵子存活率小鼠显微授精技术
目的 对已建立的非Piezo依赖的小鼠显微授精技术作进一步改良,以获得更高的卵子存活率.方法 将卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)技术中对卵子深吸持后直接深穿刺(一步法非Piezo-ICSI组)的步骤分成两步进行(两步法非Piezo-ICSI组):先浅吸持后浅穿刺,再进一步深吸持后深穿刺；另以孤雌激活发育的卵子作为卵子质量对照组.比较两步法非Piezo-ICSI组与一步法非Piezo-ICSI组卵子的存活率、原核出现率和卵裂率.结果 两步法非Piezo-ICSI组的卵子存活率(92.2％)显著高于一步法非Piezo-ICSI组(83.7％)(P＜0.01)；而原核出现率和卵裂率与一步法非Piezo-ICSI组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 小鼠卵子胞膜在被新型持卵管深吸持时的变形造成了部分卵子胞膜变脆,两步法吸持穿刺在深吸持前进行了穿刺,避免了脆性敏感时的穿刺,有利于卵子存活.
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小鼠卵子胞膜在显微穿刺中存活的膜特性因素研究
目的:拟通过特定穿刺实验来分析小鼠卵子胞膜在显微穿刺中存活的膜特性因素.方法:采用尖口注射针及37℃恒温台的显微条件下,①单纯穿刺实验:即单纯对卵子穿刺不同时间长度(1s或60 s)或不同深度(50 μm和90 μm)共4个组合组(每组n=20),比较膜凹陷的回复时间；②显微授精(ICSI)实验:延时组(n=91),在穿刺时延缓对小鼠卵子抽吸破膜的时间；加深组(n=140),改良显微持卵管,使呈喇叭形开口,可在穿刺持卵时将卵子部分吸入该开口内,以增加注射针穿刺小鼠卵子的深度；对照组(n=115),即相同于传统的人ICSI操作.结果:①穿刺时间更长或更深可显著延长膜凹陷的恢复时间；②与对照组相比,延缓对卵子的抽吸破膜时间使得小鼠卵存活率显著提高(22％ vs 48％,P＜0.01)；而应用改良的新型持卵管后,小鼠卵存活率更加显著地提高(22％ vs 82％,P＜0.01),且其正常受精率＞70％.结论:小鼠卵子胞膜并非易脆；在显微穿刺时小鼠卵子膜凹陷柔顺性随时间和深度增加而增加,从而延缓膜凹陷回复时间,有利卵子胞膜破口修复而存活.
关键词： 持卵管 卵胞浆内单精子显微注射(ICSI) 小鼠卵子 卵胞膜 存活率
