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抗人整合素β3亚基单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中表达
目的:构建抗人整合素β3亚基单链抗体(ScFv)基因,在大肠杆菌中表达并获得具有活性的ScFv.方法:从分泌抗人整合素β3亚基单抗(mAb)的杂交瘤细胞4F12中提取总RNA,RT-PCR扩增VH和VL基因,通过PCR在VH和VL基因间插入柔性连接子(Gly4Ser)3,并将其克隆至原核表达载体pQE中,获得含β3抗体基因的高效表达载体pQE-β3-ScFv.将重组子转化大肠杆菌M15后诱导表达,并对表达产物进行纯化和凝胶柱上在位复性.结果:获得抗β3单抗的VH和VL基因,构建了pQE-β3-ScFv,并在大肠杆菌中获得了表达,表达蛋白相对分子质量约为26×103,以包涵体形式存在,纯化和复性后,ELISA证实其具有良好的抗原结合活性.结论:成功构建、表达了抗人整合素β3亚基的ScFv基因,并获得了有活性的ScFv.
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槲皮素联合苏拉明对肺腺癌小鼠移植瘤生长的抑制作用
目的:观察槲皮素联合苏拉明对肺腺癌LA795细胞的T739小鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制.方法:将40只接种LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成5组:A对照组、B顺铂组(DDP)、C槲皮素组、D苏拉明组、E槲皮素+苏拉明组.用药16 d,观察药效、不良反应及肿瘤生长情况,于接种后24 d处死各组小鼠,收集移植瘤标本行光镜观察,免疫组化和图像分析系统定量检测肿瘤组织微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)及增殖核抗原(PCNA)的表达,原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数.结果:①B、C、D、E各用药组肿瘤的生长明显受到抑制,瘤质量明显低于A组(P＜0.05),其抑瘤率分别为23.03%、39.77%、34.40%、54.70%,联合用药组抑瘤作用明显者增强(P＜0.01).②光镜观察:B、C、E组肿瘤细胞出现坏死,D、E组肿瘤间质中血管数减少.③免疫组化:D、E组MVD值明显低于A、B、C组,各用药组都能减少VEGF、PCNA表达,与对照组相比均具有差异显著性;各用药组的凋亡指数都比对照组明显提高(P＜0.01).④不良反应:B组有不良反应.结论:槲皮素联合苏拉明可明显抑制肺腺癌细胞在小鼠体内的生长,其作用机制可能是抑制其微血管形成、抑制细胞增殖和促进细胞凋亡.
