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沉默CHPF基因表达对人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡及侵袭的影响
目的:探讨沉默软骨素聚合因子(chondroitin polymerizing factor,CHPF)基因对脑胶质瘤U87细胞增殖及侵袭的影响,及可能的作用机制.方法:构建携带有靶向CHPF基因shRNA(CHPF-shRNA)的重组慢病毒并感染胶质瘤U87细胞.采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测CHPF mRNA及蛋白表达水平的变化,CCK-8法检测细胞的增殖情况,FCM法检测细胞周期及细胞凋亡率,Transwell小室侵袭实验检测U87细胞侵袭能力的变化;蛋白质印迹法检测沉默CHPF基因表达后对单核细胞趋化蛋白1(monoeyte chemoattractant protein 1,MCP-1,又称CCL2)表达水平的影响.后,采用脂质体法将特异性针对CCL2基因的CCL2-siRNA转入U87细胞,用蛋白质印迹法检测对CHPF蛋白表达的影响.结果:实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,感染CHPF-shRNA后U87细胞中CHPF mRNA和蛋白的表达水平均明显被抑制(P值均＜0.05),成功建立了稳定沉默CHPF基因表达的U87细胞.与空白对照组及阴性对照组比较,CHPF-shRNA感染组细胞的增殖速度明显下降,细胞周期阻滞在G0/G1期,凋亡率明显增高(P值均＜0.05);CHPF-shRNA感染组U87细胞,穿过小室膜的细胞数明显减少,侵袭能力下降(P＜0.05);CHPF-shRNA感染组U87细胞中CCL2的表达水平明显下调(P＜0.05).沉默CCL2基因表达后,U87细胞中CHPF mRNA的表达水平无明显变化(P＞0.05).结论:下调CHPF基因表达后,可能通过调控CCL2抑制脑胶质瘤细胞的增殖及侵袭能力,并促进细胞凋亡.
