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LncRNA MALAT1通过调控miR-124-3p/IGF2BP1分子轴促进宫颈癌细胞增殖和转移
目的:探讨lncRNA MALAT1通过调控miR-124-3p/IGF2BP1分子轴介导宫颈癌细胞增殖和转移的影响.方法:选取2014年4月至2017年12月在贵阳市妇幼保健院妇产科收治的、经手术切除的45例宫颈癌患者癌组织及相应癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系SiHa、Caski、HeLa和C33a,采用qPCR法检测癌组织和癌细胞系中MALAT1的表达水平.构建MALAT1敲降载体、miR-124-3p inhibitor及IGF2BP1过表达载体转染宫颈癌细胞,采用CCK-8、Transwell、Wb及免疫荧光实验探讨MALAT1或其敲降后通过miR-124-3p/IGF2BP1分子轴对宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响.采用双荧光素酶报告基因检测lncRNA MALAT1、miR-124-3p及IGF2BP1的靶向调控关系.结果:MALAT1在宫颈癌组织和细胞系中高表达(P＜0.05或P＜0.01).同时,敲降MALAT1显著抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(P＜0.05或P＜0.01).双荧光素酶报告基因证实MALAT1靶向作用miR-124-3p并下调其表达水平,miR-124-3p可负调控IGF2BP1的表达.实验进一步证实敲降MALAT1通过靶向上调miR-124-3p对IGF2BP1的抑制作用,进而抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(P＜0.05或P＜0.01).结论:lncRNA MALAT1通过下调miR-124-3p/IGF2BP1分子轴促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,为临床宫颈癌早期诊断/治疗提供了潜在的分子靶点.
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miR-124-3p通过负调控Caveolin-1表达N2a/APPswe细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度
目的:探讨在阿尔茨海默病(Alzheimer's diseases,AD)细胞模型中miR-124-3p通过调控Caveolin-1的表达对细胞凋亡率及钙离子浓度的影响.方法:体外培养野生型N2a(N2a/WT)和N2a/APPswe细胞,real-time PCR及Western blot分别检测miR-124-3p与β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-arnyloid precursor protein,APP)mRNA及蛋白的表达.双荧光素酶报告实验分析miR124-3p与Caveolin-1之间靶向调控关系.N2a/APPswe细胞瞬时转染miR-124-3p模拟物(mimics),real-time PCR、Western blot 分别检测Caveolin-1 mRNA和蛋白的表达.N2a/APPswe细胞分别瞬时转染miR-124-3p模拟物(mimics)、pcDNA-Caveolin-1、Caveolin-1-siRNA,流式细胞仪分析细胞凋亡水平,测定细胞内游离钙离子浓度.结果:与WT组相比,APPswe组APP mRNA和蛋白水平表达都明显升高(分别为P=0.000,P=0.000),miR-124-3p表达明显降低(P=0.000).双荧光素酶报告实验表明,和与突变型载体(pGL3-Caveolin-1 3'UTR MUT)共转染组相比,与野生型载体(pGL3-Caveolin-1 3'UTR WT)共转染组的相对荧光素酶活性和明显减弱(P=0.004);转染miR-124-3p mimics后,与空载体组比较,miR-124-3p mimcs转染组的Caveolin-1 mRNA和蛋白的表达明显下调(分别为P=0.000,P=0.000);分别转染miR-124-3p mimics、Caveolin-l-siRNA后,与空载体组比较,细胞凋亡率降低(分别为P=0.000,P=0.000),游离钙离子浓度降低(分别为P=0.000,P=0.000);转染pcDNA-Caveolin-1后,得到与上述相反的结果(分别为P=0.000,P=0.000).结论:miR-124-3p可以通过靶向下调Caveolin-1的表达,抑制AD细胞凋亡,降低细胞中游离钙离子浓度,从而发挥神经保护作用,为AD的防治提供新的思路和靶点.
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过表达长链非编码RNA H19促进miR-124-3p表达抑制肝癌细胞增殖
目的 探讨长链非编码RNA H19 (long non-coding RNA H19,IncRNA H19)对miR-124-3p表达的影响及在肝癌细胞增殖中的作用.方法Real-time PCR检测肝癌细胞系及临床标本中lncRNA H19和miR-124-3p的表达;在肝癌细胞系HepG2和SMMC7721中过表达lncRNA H19,Real-time PCR 检测miR-124-3p及其靶基因cyclinD1的表达;Western blot检测cyclinD1蛋白表达水平;CCK-8法检测lncRNA H19对细胞增殖的影响;过表达lncRNA H19同时加入antagomiR-124-3p后,检测miR-124-3p及其靶基因表达情况及细胞增殖情况.结果lncRNA H19和miR-124-3p在肝癌细胞系及肝癌组织中均低表达(P＜0.05);过表达lncRNA H19后miR-124-3p表达显著增加(P＜0.05),miR-124-3p的靶基因cyclinD1蛋白和mRNA表达明显下降(P＜0.05),细胞增殖受到抑制(P＜0.05);过表达lncRNA H19同时干扰miR-124-3p后,细胞增殖抑制作用减弱(P＜0.05).结论长链非编码RNA H19通过促进miR-124-3p表达,进而抑制其靶基因cyclinD1表达而抑制肝癌细胞增殖.
关键词： LncRNA H19 miR-124-3p CyclinD1 肝癌 细胞增殖
