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AP-1在皮肤肿瘤中的表达及其意义
背景与目的:转录激活蛋白AP-1与细胞的分化、增生、调亡以及肿瘤转化密切相关.本研究探讨AP-1亚单位在皮肤肿瘤及邻近皮肤组织中的表达及其与这些肿瘤发生、发展的关系.方法: 采用免疫组织化学卵蛋白-生物素-辣根过氧化物酶法对皮肤基底细胞癌、鳞形细胞癌、原位癌、角化棘皮瘤及相邻皮肤组织中的c-jun,p-c-jun、 JunB、 JunD, c-fos、Fra-1和Fra-2进行分析 .结果:c-jun和p-c-jun在皮肤基底细胞癌、鳞形细胞癌、原位癌和角化棘皮瘤肿瘤中表达明显增强,JunB在皮肤基底细胞癌中表达明显减弱.结论:c-jun是皮肤肿瘤形成及细胞增生的促进因素,JunB则是抑制因素.
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miR-494及其靶基因JunD在损伤疝出型椎间盘突出中的表达及其临床意义
目的 探讨miR-494及其靶基因JunD在损伤疝出型椎间盘突出(IDH)中的表达及其临床意义. 方法 收集脊柱爆裂骨折手术椎间盘标本6个,髓核细胞培养,不同浓度(0,10,50,100 ng/ml)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导髓核细胞凋亡,建立髓核细胞凋亡模型,于不同时相点(0,8,16,24 h)采用qRT-PCR和流式细胞术检测髓核细胞凋亡率及miR-494的表达.AntigomiR-494在慢病毒包装后转染髓核细胞,成功敲除髓核细胞miR-494后使用TNF-α(100 ng/ml,16 h)诱导髓核细胞凋亡.采用随机数字表法进行实验分组:空白对照组(髓核细胞)、AntigomiR-494+ TNF-α组、阴性对照+TNF-α组.采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.Western blot检测JunD蛋白和细胞色素C蛋白的表达情况.荧光素酶双报告基因分析技术及生物信息学方法了解miR-494与JunD基因的靶向关系. 结果 miR-494表达量及髓核细胞凋亡率随TNF-α浓度和刺激时间的增加而增加(P＜0.05).与阴性对照+TNF-α组相比,在细胞转染后,AntigomiR-494+ TNF-α组miR-494表达量和细胞凋亡率明显下降(P＜0.05).Westernblot结果表明,AntigomiR-494+ TNF-α组JunD蛋白的表达水平较阴性对照+TNF-d组高(P＜0.05),而细胞色素C蛋白的表达水平较阴性对照+TNF-α组低(P＜0.05).荧光素酶双报告基因验证、生物信息学方法预测证实miR-494直接靶向JunD. 结论 TNF-α可诱导髓核细胞的凋亡,且呈时间和剂量依赖性.髓核细胞miR-494的表达量随TNF-α的刺激浓度、时间增加而增加.miR-494有可能是髓核细胞在TNF-α诱导下凋亡的关键调节器.miR-494基因敲除可以保护髓核细胞,其可能机制是上调靶基因JunD,并且介导细胞色素C凋亡通路.miR-494-JunD-细胞色素C信号通路可能是椎间盘退变的潜在机制之一.
