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Atp50和coxⅦa在大鼠Leydig细胞中的表达与鉴定
目的前期研究发现呼吸链相关酶cox7A2和Atp合成酶亚单位Atp50在青年和老年睾丸组织中存在明显表达差异.本研究观察两者同源序列Atp50和coxⅦa在原代培养的大鼠Leydig细胞中的表达情况,为其在雄激素合成和睾丸衰退中的作用研究奠定基础.方法分离培养大鼠Leydig细胞,提取细胞总RNA,通过RT-PCR扩增目的片断,PCR产物进行TA克隆、测序鉴定.结果RT-PCR可见Atp50和coxⅦa表达,目的片段大小分别是438bp和358bp.PCR产物片段TA克隆测序结果与原序列一致率分别为99.7%和99.8%.结论RT-PCR和TA克隆测序结果证明大鼠睾丸Leydig细胞中存在coxⅦa和Atp50表达,对于其可能参与调节睾酮合成过程则有待于进一步研究.
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大鼠睾丸组织COX Ⅶ a表达的加龄变化及与睾酮合成的相关性
目的:探讨大鼠睾丸组织COX Ⅶ a(cytochrome C oxidase Ⅶ a)表达的加龄变化及其与睾酮合成之间的相关性.方法:①选用出生后1周、3周、5周,3月和24月龄雄性SD大鼠,每组6只.②采用半定量RT-PCR法检测大鼠睾丸组织COX Ⅶ amRNA的表达.③Western blotting方法检测大鼠睾丸组织COX Ⅶ a蛋白表达.④化学发光法检测大鼠血清睾酮浓度.结果:①血清睾酮浓度3月、24月、5周、3周和1周龄组依次降低,其中3月龄和24月龄组与其余各组间差异有统计学意义(P<0.05).②COX Ⅶ amRNA水平24月、1周、3周、5周和3月龄组依次降低,其中3月龄和24月龄组与其余各组之间差异有统计学意义(P<0.05).③睾丸组织COXⅦa蛋白表达,24月龄组强,3月龄组弱,除1周龄和3周龄组之间差异无统计学意义外,其余各组之间差异均有统计学意义(P<0.05).④睾酮浓度与COXⅦamRNA水平和蛋白表达呈负相关(r=-0.580,P=0.013;r=-0.447,P=0.000),而COXⅦamRNA水平和蛋白表达呈正相关(r=0.941,P=0.000).结论:COXⅦa随增龄变化,老年大鼠COXⅦa显著上调,与睾酮合成能力下降有关,可能成为治疗PADAM的候选基因.
