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乙型肝炎病毒多聚酶末端蛋白重链可变区抗体体外抑制病毒的复制
目的 用蛋白片段互补法(PCA)选择HBV多聚酶末端蛋白(TP)重链可变区(VH)抗体,研究特异性VH抗体体外抑制HBV的复制与分泌.方法 以HBV多聚酶TP区为抗原,用PCA法进行特异性VH抗体筛选.特异性VH抗体基因定向亚克隆人真核表达载体pZeoSV2(+),构建pZeoSV2(+)-VH重组质粒,用脂质体介导的转染技术,将其导入HepG 2.2.15细胞,观察特异性抗体的生物学活性.结果 用PCA法从抗体库中选择出3个特异性抗体:VH1、VH2和VH3,其中与抗原亲和力高的是VH1.转染pZeoSV2(+)-VH1的HepG 2.2.15细胞比未转染pZeoSV2(+)-VH1或只转染空载体pZeoSV2(+)的HepG 2.2.15细胞病毒颗粒分泌明显减少,上清液内为2.978 7±0.276 1比5.150 4±0.276 1和5.295 1±0.241 0(P＜0.05);细胞内为5.283 9±0.162 9比8.300 4±0.323 2和8.532 1±0.138 3(P＜0.05).结论 用PCA法可从抗体库中选择出HBV多聚酶TP区特异性VH抗体,该抗体在体外可抑制HBV的复制与分泌.
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双分子荧光互补技术的应用与展望
双分子荧光互补技术是近年发展起来的用于体内或体外检测蛋白质相互作用的一项新技术.该技术是将荧光蛋白在合适的位点切开形成不发荧光的2个片段,这2个片段借助融合于其上的目标蛋白的相互作用,彼此靠近,重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子,从而产生荧光.BiFC方法简单直观,具有可视性的特点,对温度敏感,荧光片段种类较多,被广泛地应用到不同的细胞中,既可以检测蛋白之间的相互作用,也可以定位蛋白质相互作用的位点.此外,BiFC还能在蛋白构型的确定以及RNA的检测方面发挥作用.经过若干年的发展,双色荧光互补技术已经发展成包括多色荧光互补技术,BiFC和FRET联用技术以及BiFC和YTH联用技术在内的多种技术,拓宽了BiFC的应用.
