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人基质金属蛋白酶-1文献资料
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人基质金属蛋白酶-1的基因克隆、表达及其产物抗原性的分析
目的构建人基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因重组质粒的克隆,获得具有抗原性的人MMP-1融合蛋白.方法从人肝组织提取总RNA,以此为模板,逆转录巢式PCR扩增MMP-1全编码区基因片段,构建含目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆,经异丙基-β-D半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达MMP-1重组质粒菌,用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blot对重组蛋白进行分析鉴定.结果经核苷酸序列测定和免疫印迹鉴定,成功地构建了人MMP-1重组质粒基因工程菌,并表达具有MMP-1抗原性的融合蛋白.结论构建了人MMP-1重组质粒克隆,获得了具有抗原性的MMP-1融合蛋白,这将有助于今后制备MMP-1多克隆抗体.
关键词： 人基质金属蛋白酶-1 克隆 原核表达 抗原性 -
人源性基质金属蛋白酶-1原核表达载体的构建与鉴定
目的构建人源性基质金属蛋白酶-1(MMP-1)原核表达载体. 方法从人肝组织提取总RNA,以此为模板,逆转录巢式 PCR扩增MMP-1全编码区基因片段,构建含目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-C2x重组质粒亚克隆,经双酶切及核苷酸测序进行分析鉴定. 结果成功地构建了人MMP-1原核表达载体. 结论构建的人MMP-1原核表达载体,为以后MMP-1融合蛋白的表达并获得具有抗原性的MMP-1融合蛋白奠定了基础.
关键词： 人基质金属蛋白酶-1 原核表达载体 构建与鉴定
