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点突变诱变文献资料
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KatG基因点突变与结核分枝杆菌异烟肼耐药相关性研究
目的探讨过氧化氢酶编码基因(KatG)基因点突变和结核分枝杆菌异烟肼(INH)耐药性之间的关系,筛选相关位点用于筛查临床INH耐药株基因型.方法采用三步法聚合酶链反应(PCR)对临床耐异烟肼菌株中发现的6个位点进行定点诱变,用含诱变基因的pET24b质粒转化大肠埃希菌BL21菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,使用镍亲和柱和Q-琼脂糖快速流动凝胶纯化各KatG诱变蛋白并测定其过氧化氢酶和过氧化物酶活性.结果完成KatG基因6个位点的诱变及相应诱变蛋白的表达和纯化,过氧化氢酶、过氧化物酶活性测定发现,3个诱变蛋白[KatG(W321G)、KatG(R418Q)和KatG(A456S)]基本失活,其余3个诱变蛋白的活性亦有不同程度下降.结论所引入的6个突变均可造成KatG蛋白过氧化氢-过氧化物酶活性下降,与结核分枝杆菌INH耐药有关,可用于筛查临床INH耐药株基因型.
