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日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原的融合表达及抗原性分析
目的重组表达制备日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原(SjMP10).方法根据日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原SjMP10分子的读框序列设计合成1对引物,扩增SjMP10 DNA片段并克隆到表达载体pGEX-4T-3中.转化BL21(DE3)后,诱导表达谷胱甘肽转移酶-虫卵中毛蚴抗原10(GST-SjMP10)融合蛋白.采用洗脱法制备GST-SjMP10融合蛋白,应用免疫印迹法(Western blotting)和淋巴细胞增殖试验进行重组蛋白的抗原性分析.结果SjMP10基因克隆到表达质粒pGEX-4T-3后,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导能表达出Mr 39000的GST-SjMP10融合蛋白,经电洗脱法纯化的上述重组融合蛋白可被血吸虫感染兔血清所识别,并能刺激血吸虫感染鼠脾淋巴细胞增殖.结论日本血吸虫虫卵中毛蚴抗原SjMP10融合表达获得成功.
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日本血吸虫虫卵毛蚴抗原SjMP10的表达及血清学诊断价值
目的 优化融合蛋白GST-SjMP10的体外表达条件,探讨GST-SjMP10用作ELISA包被抗原对血吸虫病的诊断价值.方法 用不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)对重组蛋白GST-SjMP10诱导表达,用亲和层析法纯化,用纯化的重组GST-SjMP10蛋白作为抗原,用ELISA法检测急性、慢性血吸虫感染患者、肝吸虫病患者及健康人血清IgG类抗体,观察该抗原用于血吸虫病诊断的敏感性及特异性.结果 当IPTG的浓度为0.1 mmol/L时,重组表达的GST-SjMP10融合蛋白大部分处于可溶性状态,可用亲和层析法纯化.以纯化的GST-SjMP10建立ELISA法检测急性、慢性血吸虫感染患者血清IgG类抗体的阳性率分别为97.5%和96.7%,与肝吸虫病患者血清无交叉反应,健康人血清无假阳性反应.结论 成功表达GST-SjMP10融合蛋白,用于诊断血吸虫病有较高的特异性和敏感性.
