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折叠引物文献资料
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单管单轮多重PCR检测4种疟原虫混合血样
目的 建立一种可同时检测4种疟原虫单一及混合感染的单管单轮多重PCR技术. 方法 在快速巢式PCR的基础上,设计折叠引物,优化PCR反应试剂的主要组分浓度及各条引物的退火温度,建立折叠引物多重PCR法(FP-PCR).利用优化后的FP-PCR法,对间日疟原虫(Plasmodium vivax)、恶性疟原虫(Pfalciparum)、卵形疟原虫(P.ovale,包括wallikeri亚种)和三日疟原虫(P.malariae)的单一及混合疟原虫DNA模板进行检测,分析该方法的敏感性和特异性. 结果 在7次重复实验中,4种疟原虫单一感染检出的低浓度均接近1个/μl血.此外,在检测2～4种原虫以高、低密度相差100倍的模拟混合感染的滤纸血样中,FP-PCR法正确检出每个组合的所有虫种的成功率为68％ (57/84).在10份健康人滤纸血样中,FP-PCR法除产生少量二聚体外无任何扩增条带. 结论 FP-PCR法仅需单管单轮扩增即可同时检测4种人疟原虫单一或混合感染,为疟疾的监测和筛查提供了简便、可靠的诊断方法.
