首页 > 文献资料
-
CCK-8法与FACS对抗CD3抗体诱导小鼠Treg细胞免疫抑制作用的比较
用非放射性同位素方法检测抗CD3抗体诱导的小鼠调节性T细胞(Treg)对效应性T细胞(Teff)增殖的抑制作用.本实验用丝裂霉素C处理脾细胞获得抗原递呈细胞(APC),用免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+ CD25+的Treg和CD4+CD25-的Teff,二者按1:2比例与APC共培养,并加入anti-CD3抗体刺激3d,加CCK-8孵育检测细胞增殖.另外,CFSE标记Teff,与Treg共同培养,加入anti-CD3抗体刺激3d,流式细胞仪分析Treg对Teff增殖的抑制作用.流式分析表明,0.1 mg/L、1 mg/L的anti-CD3抗体均能明显促进Teff细胞增殖,加Treg细胞能明显减低细胞增殖的比例和减少增殖的代数.anti-CD3抗体剂量增加到1 mg/L,Teff的增殖较0.1 mg/L剂量刺激时没有明显改变,但Treg的抑制功能减弱了.CCK-8法与流式检测得出的结果一致.CCK-8法和流式细胞术(FACS)均可以用来检测Treg细胞的免疫抑制作用,并且采用0.1 mg/L anti-CD3抗体刺激,对Treg细胞免疫抑制作用的检测效果更好.
-
IL-4、IL-10和抗IL-12受体β1 mAb抑制IL-23诱导正常人记忆T细胞 IFN-γ产生
目的探讨重组人白介素23(IL-23)是否能够诱导正常人T细胞IFN-γ的产生,作用的靶细胞亚群和调节因素.方法正常人PBMC在抗CD3 (anti-CD3)单克隆抗体或anti-CD3和抗CD28(anti-CD28)单克隆抗体刺激的条件下与IL-23进行培养,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中IFN-γ的水平;同时采用流式细胞仪,在单个细胞水平上分析IL-23诱导PBMC IFN-γ表达的T细胞亚群.结果在未经任何刺激的情况下,PBMC产生很低或不产生IFN-γ.IL-23呈剂量依赖方式促进由anti-CD3活化的PBMC IFN-γ产生.细胞亚群分析的结果表明,IL-23诱导记忆CD4+和CD8+ T细胞表达IFN-γ,对活化的CD4+ T细胞作用较为明显.Th2细胞因子(IL-4、IL-10)和抗IL-12受体β1 mAb (IL-12Rβ1)抑制IL-23诱导T细胞IFN-γ产生.结论 IL-23促进活化的记忆CD4+和CD8+ T细胞IFN-γ的产生. Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1 mAb抑制由IL-23诱导IFN-γ产生,提示这些细胞因子和抗体对IL-23引起的自身免疫病具有拮抗作用.
