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人工修饰双等位基因特异性引物扩增法检测CYP1B1多态性与肺癌易感性的关系
[目的] 应用一种新的快速检测单核苷酸多态性(SNP)方法--人工修饰双等位基因特异性引物扩增(diASA-AMP)法研究CYP1B1基因Leu432Val位点多态性与江苏汉族人群肺癌易感性的关系.[方法] 采用配对病例-对照研究,收集江苏汉族人群原发性肺癌患者227例为病例组,同时按1∶1配对选择非肿瘤、非呼吸道疾病患者227例为对照组.应用diASA-AMP方法检测了病例组与对照组CYP1B1基因Leu432 Val位点多态性,分析Leu432 Val位点突变与肺癌易感性之间的关系.并应用测序法验证diASA-AMP法的特异性.[结果] CYP1B1基因Leu432Val位点突变C和G的基因频率在对照组和病例组的分布差异无显著性(χ2=0.201,P>0.05),单纯CYP1B1基因Leu432Val位点突变与肺癌危险性也不存在明显的相关关系(OR=1.085,95%CI=0.730～1.615),但该位点突变与吸烟可能有一定协同作用,携带G等位基因的基因型可增加吸烟者患肺癌的危险性(OR=2.057,95%CI=1.162～3.642).对照组的CYP1B1 C和G等位基因频率与现有的中国汉族人群资料结果相近,测序结果与diASA-AMP结果相符.[结论] CYP1B1 Leu432Val多态性可能是江苏汉族人群吸烟者肺癌发生的易感因素.diASA-AMP法可用于单核苷酸多态性的快速测定,特异性高,便于推广使用.
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人工修饰双等位基因特异性引物扩增法测定人ABC1基因突变点I823M
目的建立一种简单、快速测定三磷酸腺苷结合盒转运子1(ATP binding-cassette transporter 1, ABC1)基因突变点I823M的方法.方法设计两种等位基因特异性引物,分别与DNA双链的两条单链互补,其3′端正好与单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点重合,由引物的3′端控制着引物的延伸反应,根据延伸反应的长度确定等位基因的类型,并通过在引物的3′端区域引入一个人为不匹配碱基来提高延伸反应的特异性.结果人为引入错配碱能提高单核苷酸多态性分析的特异性;通过优化实验条件,用本室建立的双等位基因特异性扩增法,可测定人 ABCA1基因突变点I823M的不同SNP类型.结论人工修饰双等位基因特异性引物扩增法可用于人基因组中单核苷酸多态性的快速测定,不需使用复杂仪器设备,便于推广使用.
关键词： 基因突变 等位基因特异性延伸反应 人为错配碱基 ABC1基因
