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抑癌基因 ING1在大肠癌中的表达及预后意义
目的：探讨ING1基因在散发性大肠癌中的表达与预后及多个临床病理变量之间的关系，并分析其在大肠癌预后的危险因素中是否具有显著意义。方法应用定量RT－PCR方法检测82例大肠癌手术切除标本及相应的癌旁组织中ING1 mRNA的表达水平，分析其表达的差异，研究其表达水平与大肠癌患者临床病理特征及预后的关系。结果（1）ING1 mRNA在大肠癌及癌旁组织中均可被检出，同一配对组织相比，癌旁组织中ING1表达量明显高于肿瘤原发灶；（2） ING1 mRNA的表达与大肠癌的浸润层次、淋巴结转移、远处转移以及TNM分期密切相关；（3）肿瘤组织与癌旁组织ING1表达量相比，比值越低其DFS也越低（P＜0．0001）；（4）经单因素及多因素COX模型分析后显示，ING1作为候选抑癌基因可作为大肠癌预后的独立预测因素（ P＜0．0001）。结论 ING1的过度表达是大肠癌发生过程中的分子事件，可能参与大肠癌的发展过程。 ING1可作为判断大肠癌预后的重要分子标志。
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2种不同ING1 mRNA剪接体在大肠癌组织中的表达研究
目的探讨抑癌基因ING1在大肠癌发生和进展中的作用和意义.方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ING1 mRNA的表达;用单链构像多态性分析(PCR-SSCP)方法进行突变检测;用微卫星位点进行杂合性缺失(LOH)分析.结果p33/ING1 mRNA和p47/ING1 mRNA在大肠癌组织中的表达强度明显弱于正常大肠黏膜组织者;这2种不同ING1 mRNA剪接体之间的表达强度相一致.Dukes C、D期患者癌组织中这2种ING1 mRNA的表达强度明显弱于Dukes A、B期者.35例中均未发现ING1基因突变,仅有4例(11.4%)出现微卫星位点的LOH.结论 p33/ING1 mRNA和p47/ING1 mRNA在大肠癌组织中的表达强度相一致;它们的低表达与大肠癌的发生、进展有密切关系.ING1基因的突变和杂合性缺失少见,其低表达可能是发生在转录或转录后阶段.
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生长抑制因子1剪接变异体调控p53信号通路诱导肝癌细胞凋亡
目的 探讨生长抑制因子(ING1)调控p53信号通路诱导肝癌细胞凋亡的途径.方法 通过脂质体转染的方法在体外培养的肝癌细胞株HepG2中过表达ING1基因3种剪接变异体,采用流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡率和细胞周期变化,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法检测ING1、p53及其下游信号基因bcl-2、bax、p21waf1、mdm2、p14arf mRNA和蛋白表达情况,荧光素酶双标报道基因检测下游p21waf1启动子活性,Western blot检测野生型p53蛋白半衰期变化,使用免疫共沉淀法(IP)观察ING1剪接体与mdm2、p14arf蛋白间的结合情况.结果 HepG2细胞转染过表达ING1不同剪接变异体,pcDNA3-ING1b[(24.36±0.97)%]和pcDNA3-ING1c[(27.33±1.12)%]组细胞凋亡率显著高于空载体组[(8.22%±0.86)%](P<0.01),而pcDNA3-ING1a组细胞凋亡率[(8.90±1.03)%]与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05).与空载体组比较,pcDNA3-ING1b和pcDNA3-ING1c组均出现G0/G1期阻滞(P<0.05);而pcDNA3-ING1a组各细胞周期的比例与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR及Western blot法结果显示过表达ING1b或ING1c使HepG2细胞内源性bax、p21waf1、p14arf mRNA及蛋白表达量明显增高(P<0.01);内源性bcl-2、mdm2 mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.01);过表达ING1a的HepG2细胞bax、bcl-2、p21waf1、mdm2、p14arf mRNA及蛋白表达与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05).ING1b和ING1c增强p21waf1启动子活性,延长野生型p53蛋白的半衰期,促进p53蛋白乙酰化,并且与p53反馈调节环路基因mdm2和p14arf结合,维持p53蛋白的稳定性和促进p53蛋白的活性.结论 ING1剪接变异体通过与p53负反馈调节基因mdm2竞争性结合p53蛋白,延长野生型p53蛋白半衰期,并促进p53蛋白乙酰化,增强p53蛋白下游基因bax、p21waf1、p14arf表达,抑制bcl-2、mdm2基因表达,促进肝癌细胞凋亡.
