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人腺病毒3型六邻体基因的克隆与鉴定
目的克隆人腺病毒3型(Ad3)六邻体-L1(Hexon-L1)、六邻体-L2(Hexon-L2)区基因,构建含有该基因的重组质粒,并进行测序鉴定,为进一步构建表达载体,制备基因工程疫苗打下基础.方法从Ad3感染的HeLa细胞中提取 Ad3 DNA, 用PCR方法扩增Hexon-L1、Hexon-L2基因,将得到的片段定向克隆到克隆载体pUC19质粒中,对克隆片段进行DNA测序鉴定.结果构建了重组质粒pUC19Hexon,测序结果与Genebank中该序列进行同源性比较证明克隆的片段为Ad3六邻体序列.结论成功克隆了Ad3的Hexon-L1、Hexon-L2区基因.
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人3型腺病毒六邻体基因表达质粒的构建及表达
目的表达人腺病毒3型六邻体蛋白,为制备基因工程疫苗打下基础.方法 BamHⅠ和SalⅠ双酶切重组克隆质粒pUC19Hexon和载体pQE31,将得到的目的片段定向连接到表达载体pQE31中,对目的片段进行DNA测序鉴定,IPTG诱导高效表达.结果构建了表达重组质粒pQE31 Hexon,测序鉴定了克隆序列的准确性.在大肠杆菌中成功地表达了Ad3六邻体蛋白.结论成功表达了Ad3的六邻体蛋白.
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重组人3型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
目的 制备抗人3型腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体并对单抗进行鉴定.方法 用纯化的重组六邻体蛋白免疫BALB/c小鼠.取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合.经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得单抗.使用ELISA、Western blot和中和实验等方法鉴定单抗的敏感性、特异性以及中和活性.结果 ELISA和免疫印迹结果表明这4株单抗与腺病毒六邻体蛋白可以特异性结合.而且,4C6株单抗具有中和活性.结论 获得了4个单抗为腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体,可用于3型腺病毒的早期诊断和药物治疗的研究.
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2004年广州地区流行的3型腺病毒六邻体基因序列分析
[目的]分析2004年夏广州市某幼儿园流行的3型腺病毒(adenovirus type 3,Ad3)的六邻体基因序列,为Ad3的基础及临床研究提供依据.[方法]采集急性咽结膜炎患儿急性期的眼、咽拭子,提取腺病毒DNA,分两段进行PCR,扩增腺病毒六邻体基因,将扩增的片断进行T-载体克隆及序列分析.[结果]成功地测出了Ad3六邻体基因序列,并在Genebank登记注册,注册号AY878716,与Genebank中Ad3六邻体基因序列进行同源性比较,同源性为99%.[结论]腺病毒(Ad3)六邻体基因序列,并与Genebank中Ad3六邻体基因序列变异是否与其毒力的改变和致病性、传染性相关,尚需作进一步的研究探索.
