首页 > 文献资料
-
重组鼠疫菌F1抗原制备胶体金免疫层析试纸条的研制与现场应用评价
目的 表达和纯化重组鼠疫菌F1抗原(rF1),构建胶体金免疫层析试纸条(GICA),检测和评价该试纸条的现场应用效果.方法 以镍离子金属螯合(Ni-NTA)亲和层析柱和脱盐柱对rF1进行纯化并构建GICA,应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)3种方法对1份鼠疫菌免疫兔血清和1 685份现场血清样本(包括94份人、939份犬、34份猫、609份鼠和9份旱獭)进行F1抗体检测.结果 rF1得到高效表达并实现较好纯化.GICA、ELISA、IHA 3种方法检测1份鼠疫菌免疫兔血清,结果均为阳性,低检测滴度ELISA法高于GICA法(1∶10×211比1∶10×29),GICA法高于IHA法(1∶10×29比1∶10×28).对1 685份现场血清样本进行检测,GICA法阳性89份(5.28％),IHA法阳性53份(3.15％),ELISA法阳性101份(5.99％);GICA法与IHA法的总符合率为97.3％,与ELISA法的总符合率为97.9％.配对资料x2检验结果显示,GICA法阳性检出率高于IHA法(x2=26.63,P＜0.05),但与ELISA法比较,差异无统计学意义(x2=3.36,P＞0.05).结论 rF1表达和纯化成功,用其构建的GICA特异性强,敏感性高,与IHA、ELISA法结合应用,能有效提高鼠疫检测的速度和质量.
关键词： 鼠疫 重组F1抗原 胶体金免疫层析试纸条 应用评价 -
诊断家畜日本血吸虫感染胶体金免疫层析试纸条的研制
目的 研制一种可用于疫区现场快速诊断家畜日本血吸虫感染的胶体金免疫层析试纸条.方法 设计重组蛋白G并在大肠杆菌中表达,得到重组蛋白.对重组蛋白G进行胶体金标记并制备金标垫,分别用可溶性虫卵抗原(SEA)和重组蛋白G划线,作为检测线和质控线.采用组装的试纸条检测标准阴、阳性BALB/c鼠与新西兰大白兔血清,以及粪检阴、阳性的绵羊与水牛血清,评估其灵敏度和特异度;利用组装的试纸条检测前后盘吸虫病病牛血清,评价其交叉反应性.结果 成功构建了重组蛋白G的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达.以重组蛋白G制备的试纸条可用于检测日本血吸虫感染BALB/c鼠、新西兰大白兔、水牛、绵羊血清抗体.该试纸条检测日本血吸虫感染小鼠与兔血清的灵敏度、特异度均为100％;检测绵羊血清的灵敏度为100％,特异度为88.46％;检测水牛血清的灵敏度为94.44％,特异度为100％;其与前后盘吸虫交叉反应率为5.88％.结论 成功研制能检测多种家畜血吸虫病的胶体金免疫层析试纸条,其检测家畜血吸虫感染的灵敏度和特异度均较高.
关键词： 日本血吸虫病 胶体金免疫层析试纸条 免疫诊断 家畜 重组蛋白G -
鼠疫F1抗体检测金标试纸条样本稀释液的筛选
目的 为鼠疫F1抗体检测金标试纸条筛选出较为合适的样本稀释液,以有效避免其非特异性反应,提高试纸条的检测质量.方法 选取4种血清样本稀释液,对同一份鼠疫菌免疫兔血清稀释后作鼠疫F1抗体检测,筛选出不影响敏感性的稀释液;用该稀释液检测既往鼠疫患者血清、既往发生非特异反应的血清及现场样本,验证该稀释液的检测效果.结果 4种稀释液检测同一份鼠疫菌免疫兔血清的高检出滴度无明显差异;用含0.02 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)pH7.4、含0.5％牛血清白蛋白第五组份(ABV)生理盐水、含5％兔血清生理盐水对比检测10份既往鼠疫患者血清检测均为阳性;用含0.5％ ABV生理盐水检测37份既往发生非特异反应血清和293份现场采集犬血清均为阴性.结论 含0.5％ ABV生理盐水能有效避免胶体金免疫层析法(GICA)非特异性反应的发生而不影响敏感性,可作为鼠疫F1抗体检测金标试纸条的稀释液.
关键词： 鼠疫 F1抗体 胶体金免疫层析试纸条 样本稀释液 筛选
