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Robo1与Nek9相互作用并影响胃癌细胞迁移
目的:筛选与Robo1分子相互作用的蛋白质,为揭示Robo1调节胃癌细胞迁移能力的机制提供线索 方法:通过Transwell迁移实验检测下调Robo1对胃癌细胞SGC7901迁移能力的影响,并对胃癌细胞SGC7901利用Robo1抗体和lgG分别进行免疫沉淀,再经质谱检测及生物信息学分析筛选与Robo1分子特异性结合的蛋白质,通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)验证蛋白质相互作用 结果:(1)转染Robo1小干扰RNA(siRNA)的SGC7901细胞较转染阴性对照RNA的迁移能力显著降低.(2)通过免疫沉淀、质谱检测和生物信息学分析的两次生物学重复得到一系列与Robo1相互作用的蛋白,筛选出丰度高、重复性好且功能相关的Nek9蛋白 (3)Co-IP实验结果显示与对照抗体相比,Robo1抗体可特异性地将Nek9沉淀下来,同时Nek9抗体也可特异性地将Robo1共沉淀下来,确证了Robo1-Nek9的相互作用.结论:Nek9是与Robo1相互作用的蛋白质,Robo1下调影响人胃癌细胞系SGC7901的迁移能力,可能通过Nek9起作用Robo1-Nek9的相互作用为进一步研究Robo1在胃癌细胞中的功能及机制提供了有利的线索.
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基因NEK9在肝细胞癌组织中的表达效应及其临床意义
目的 研究基因NEK9在肝细胞癌组织中的表达效应,并探讨其表达量与其临床病理参数的关系.方法 收集从2010~2011年我院60例原发性肝细胞癌患者肝癌组织及其配对癌旁组织,并统计分析其临床病理资料;同时采用荧光定量PCR、免疫组化方法检测肝癌组织和癌旁组织中NEK9基因和蛋白的表达水平,分析NEK9的表达量与其相对应临床病理参数之间的关系.结果 相对于癌旁组织,肝细胞癌组织中基因NEK9的表达量在mRNA水平显著高表达(25/30)(P<0.05),在蛋白质水平亦呈显著高表达(65%及21.7%)(P<0.05);癌组织中NEK9的表达水平与TNM分期、转移和复发等临床病理参数有相关性(P<0.05);癌组织中NEK9高表达组患者的术后无瘤生存时间较低表达组明显缩短(P<0.05).结论 原发性肝细胞癌组织中NEK9的高表达与肿瘤大小、TNM分期、转移和复发密切相关,并有可能成为预测肝癌患者预后的生物学标志物.
