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人γhG-CSF动员的外周血采集物来源的树突状细胞成熟诱导的研究
目的 探讨优化人γhG-CSF动员的外周血采集物来源的树突状细胞(DC)成熟诱导条件.方法 利用密度梯度离心法从重组人粒细胞集落刺激因子(γhG-CSF)动员的外周血采集物分离出单个核细胞,以重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和重组人白细胞介素-4(IL-4)体外诱导成不成熟树突状细胞(imDC),分别采用传统细胞因子鸡尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2)和改良细胞因子鸡尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、polyI:C、CpG ODN)刺激成熟.3d后收获成熟DC,观察细胞形态、流式细胞仪检测DC的内吞能力通过异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)、检测DC表面CD83、CD1a、CD80、HLA-DR、CD86和CCR-7,酶联免疫吸附法(ELISA)检测其IL-12的分泌,MTT法检测其刺激淋巴细胞增殖活性.结果 两种方法均能诱导DC成熟,以改良细胞因子鸡尾酒效果更佳,FITC-Dex-tran的内吞能力明显下降；CD83、CD1a的表达率分别是84.44％、87.94％ (P ＜0.05)；IL-12分泌量明显增高,成熟DC能有效的刺激T淋巴细胞增殖.结论 改良细胞因子鸡尾酒法可能是诱导DC成熟的佳方法.
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改良细胞因子鸡尾酒诱导肺腺癌细胞总RNA转染树突状细胞疫苗抗肿瘤效应的体内研究
目的 探讨不同细胞因子鸡尾酒诱导的树突状细胞(DC)疫苗对裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用.方法 从38名外周血于细胞移植术供者的外周血中分离单个核细胞(PBMC),诱导成未成熟DC,将人肺腺癌细胞A549总RNA电转染入DC,分别用传统细胞因子鸡尾酒(IL-6、IL-1β、TNF-α、PGE2)和改良细胞因子鸡尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、poly Ⅰ∶C、CpG ODN)刺激DC成熟.致敏DC与自体T细胞混合培养,诱导产生抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),用流式细胞术鉴定T细胞表型,ELISA法检测IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-5和IL-10的分泌.建立肺腺癌A549荷瘤裸鼠模型,随机分为空白对照组、未成熟组、传统组和改良组(n=5),于肿瘤接种d15、d22、d29给予相应CTL治疗,测量肿瘤体积和重量,免疫组化法和Western blotting检测肿瘤组织COX-2、VEGF、Bcl-2和Bax蛋白表达水平.结果 1)CD3+CD8+T细胞表达率(％):未成熟组、传统组和改良组分别为35.00±3.24 vs 57.10±2.69 vs 63.98±1.96(P ＜0.05);2)IFN-γ浓度(pg/mL):3组分别为160.12±42.01 vs 263.17±55.30 vs 1 034.30±253.07(P ＜0.05);TNF-α浓度(pg/mL):3组分别为72.72±9.13 vs 65.20±8.03 vs 295.89±123.80(P ＜0.05);IL-10浓度(pg/mL):3组分别为7.26±1.76 vs 31.06±4.19 vs 44.01±12.12(P ＜0.05);3组IL-4、IL-5含量均未检测出,可见改良组T细胞分泌Th1型细胞因子IFN-γ和TNF-α的能力较未成熟组和传统组明显增强;3)经CTL免疫治疗后,裸鼠肿瘤体积(mm3):3组分别为512±33 vs 345±63 vs 203±52(P ＜0.05),且改良组抑瘤率大,为69.62％;4)改良组DC诱导的CTL明显上调Bax的表达,下调COX-2、VEGF和Bcl-2的表达.结论 改良细胞因子鸡尾酒诱导肺腺癌细胞总RNA转染的DC疫苗能诱导Th1型免疫应答及产生有效的抗原特异性CTL,对肺腺癌裸鼠移植瘤具有良好的抑制作用.
