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复方鱼腥草提取物不同组分对高糖培养小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响
目的:比较复方鱼腥草提取物挥发油组分、水提组分、醇提组分和总提取物对高糖条件下小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响.方法:高糖条件下培养小鼠肾小球系膜细胞,分成复方鱼腥草挥发油组分、水提组分、醇提组分和总提取物4个药物组,各组给药浓度均为1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0、128.0mg/L,给药24h后以MTT法测定复方鱼腥草提取物对小鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用.结果:复方鱼腥草不同提取物对高糖条件下小鼠肾小球系膜细胞的增殖均具有抑制作用,其抑制效果具有浓度依赖性;以GraphPad Prism 5计算得挥发油组分IC50为124.9 mg/L,水提组分IC50为37.8 mg/L,醇提组分IC50为44.6 mg/L,总提取物IC50为27.7 mg/L.结论:复方鱼腥草提取物不同组分对高糖培养肾小球系膜细胞增殖均具有抑制作用,总提取物效果明显.
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SRT1720对高糖诱导的小鼠系膜细胞凋亡的影响
目的 观察Sirt1激活剂SRT1720对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的作用.方法 体外培养小鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常糖组、正常糖+甘露醇组、高糖组及高糖+SRT1720组.采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测活性氧簇(ROS)产生;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK、Sirt1、p53、乙酰化p53及细胞色素C的表达;实时定量PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA的表达.结果 与正常糖对照组相比,高糖组系膜细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加,cleaved caspase-3、p-p38 MAPK和乙酰化p53表达增高、Bax/Bcl-2比率明显升高、Sirt1表达下降以及细胞色素C易位.SRT1720干预能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡和ROS产生;下调cleaved caspase-3、乙酰化p53和p-p38 MAPK的表达;上调Sirt1的表达;减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素C 易位.结论 SRT1720能够抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡,可能是通过减少ROS产生、保护线粒体功能、抑制p53乙酰化以及p38MAPK信号通路激活而实现的.
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抗氧化肽SS-31对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响
目的 观察抗氧化肽SS-31对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响.方法 将体外培养小鼠肾小球系膜细胞分为正常糖组、正常糖+甘露醇组、高糖组及高糖+SS-31组.采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞ROS水平;Western blot检测caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38 MAPK及细胞色素C的表达.结果 与正常糖组相比,高糖组系膜细胞ROS产生和细胞凋亡明显增加,cleaved caspase-3和p-p38 MAPK表达增高,Bax/Bcl-2比率明显升高以及细胞色素C易位.SS-31干预能够明显抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡和ROS产生,下调cleaved caspase-3和p-p38 MAPK的表达,减少Bax/Bcl-2比率和细胞色素C易位.结论 SS-31能够抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡可能是通过减少ROS产生,保护线粒体功能,抑制p38MAPK信号通路激活而实现的.
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雷公藤内酯醇抑制小鼠肾小球系膜细胞表达IP-10及其机制研究
目的 探讨雷公藤内酯醇(TPL)对γ干扰素(IFN-γ)诱导的小鼠肾小球系膜细胞(MMC)表达γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)的影响及其调控机制,为TPL应用于狼疮肾炎的治疗奠定理论基础、提供实验数据.方法 将MMC随机分为空白组、IFN-γ激组、TPL干预组,用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测各组中IP-10 mRNA相对表达量;用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞培养上清液中IP-10分泌量;用蛋白印迹法(Western blot)检测各组中JAK/STAT1信号通路相关蛋白JAK1、JAK2、STAT1及其磷酸化蛋白p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1,以及IFN-γ受体(IFN-γRβ)和JAK/STAT1信号通路负反馈调节蛋白SOCS1的表达情况.结果1)MMC经不同质量浓度(2、4、8、10 ng/ml)TPL预处理2h后再加入IFN-γ同作用24h,IP-10 mRNA相对表达量与刺激组相比分别下降45.35％、65.40％、89.76％和94.72％(P均＜0.01);IP-10蛋白分泌量分别下降了5.21％ (P=0.531)、54.70％(P＜0.01)、87.17％(P＜0.01)和92.45％(P＜0.01).2)MMC经TPL预处理40min后再加入IFN-γ同作用20 min,JAK1、JAK2、STAT1蛋白磷酸化水平与刺激组相比明显降低(PJAK1＜0.01、PJAK2＜0.01和PSTAT1＜0.05).3)MMC经IFN-γ刺激后,IFN-γRβ蛋白表达水平与空白组相比明显增加(P＜0.01);经TPL干预后,IFN-γRβ蛋白表达水平与刺激组相比明显减少(P＜0.01).4)IFN-γ刺激MMC后,SOCS1蛋白表达水平与空白组相比小幅升高(P＜0.05);而经TPL刺激后,SOCS1蛋白表达与刺激组相比明显增加(P＜0.01).结论 TPL可能通过抑制JAK/STAT1信号通路,从而下调IFN-γ导的MMC表达IP-10;抑制IP-10表达,减轻或阻止炎症反应,有望成为TPL治疗狼疮肾炎的新靶点.
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γ干扰素诱导小鼠肾小球系膜细胞表达IP-10及其机制研究
目的 探讨γ干扰素对小鼠肾小球系膜细胞(MMC)表达γ干扰素诱导蛋白10 (IP-10)的影响及其机制.方法 将MMC随机分为空白组、γ干扰素刺激组、α-氰基-(3,4-羟基)-N-苄苯乙烯胺(AG490)干预组,运用实时荧光定量PCR检测IP-10 mRNA相对表达量;酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中IP-10蛋白分泌量;蛋白质印迹法检测JAK/STAT1信号通路相关蛋白JAK1、JAK2、STAT1及其磷酸化蛋白p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1表达情况.结果 γ干扰素刺激MMC后IP-10 mRNA及蛋白分泌量明显增多(P＜ 0.01),并呈浓度、时间依赖性;AG490干预后,与刺激组相比,IP-10 mRNA相对表达量下降了81.16％ (P＜ 0.01),IP-10蛋白分泌量下降了91.81％ (P＜ 0.01);γ干扰素刺激后p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1蛋白表达明显增加(P＜0.01),经AG490干预后p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1蛋白表达减少(P＜0.01).结论 γ干扰素通过激活JAK/STAT1信号通路诱导MMC表达IP-10;抑制JAK/STAT1信号通路对减少MMC表达IP-10具有重要意义.
