首页 > 文献资料
-
益气养阴活血方药对高糖培养下视网膜神经节细胞生长抑制作用的影响
目的:观察益气养阴活血中药对高糖条件下大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)生长抑制作用的影响.方法:体外培养新生大鼠视网膜神经节细胞,分为正常对照组、正常中药干预组、高糖组及高糖中药干预组.应用CCK-8测定各组RGCs不同培养时间的细胞生长抑制率.结果:高糖对RGCs呈时间依赖性抑制其生长(P<0.01),益气养阴活血中药血清可降低高糖培养下RGCs的生长抑制率(P<0.01),结论:益气养阴活血中药能在一定程度上减轻高糖对视网膜神经节细胞的生长抑制作用,对高糖条件下RGCs具有保护作用.
-
优视胶囊对急性高眼压家兔眼压及神经节细胞的影响
目的:观察优视胶囊对急性高眼压兔眼压的影响及对视网膜视神经的保护作用。方法:采用自行设计的上巩膜静脉结扎法建立18只兔眼急性高眼压动物模型，于造模前1周至造模后3天共10天内给予具活血化瘀、开窍明目功效的优视胶囊灌胃，18只造模眼随机分为模型组、低剂量组和高剂量组，每组6眼，与18只正常眼进行对照。实验过程中测量眼压并行视网膜神经节细胞计数。结果:①造模后即可获得平均眼压高于6.83kPa并能持续3天以上的高眼压动物模型，优视胶囊高、低剂量组表现出轻微的降眼压作用。②持续性的高眼压可造成视网膜神经节细胞减少，但高、低剂量组经优视胶囊治疗后高眼压模型眼神经节细胞数高于模型组，提示优视胶囊具有保护或改善急性高眼压后兔眼视网膜神经节细胞的作用。结论：优视胶囊对急性高眼压兔眼视网膜视神经具有保护的作用。
-
葡萄籽原花青素对氯化钴诱导的视网膜神经节细胞 RGC－5缺氧损伤的保护作用
目的：探讨体外葡萄籽原花青素对氯化钴致视网膜神经节细胞RGC－5缺氧损伤模型的保护作用。方法：采用氯化钴（400μmol／L）诱导RGC－5细胞化学缺氧损伤，观察葡萄籽原花青素（40μg／mL ）对缺氧的抗损伤作用。以MTT法检测细胞存活率；Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡情况；以H2 DCFDA荧光法检测细胞内活性氧的变化；实时定量PCR检测细胞Bcl－2、半胱酰胺天冬氨酸蛋白酶（ caspase ）9和caspase 3 mRNA水平。结果：与缺氧对照组比较，葡萄籽原花青素预处理可提高细胞存活率（ P＜0．001）、减少细胞凋亡（ P＜0．001） ，并减少细胞内的活性氧（ P ＜0．001）；葡萄籽原花青素还显著升高 Bcl－2基因的表达（ P ＜0．001） ，显著降低caspase 9和caspase 3基因的表达（ P＜0．001）。结论：葡萄籽原花青素对氯化钴诱导的视网膜神经节RGC－5细胞缺氧损伤起保护作用，其保护作用可能与细胞内活性氧减少、Bcl－2基因表达上调及casepase 9和casepase 3基因表达下调有关。
-
G蛋白偶联受体17在视网膜神经节细胞缺氧损伤中的作用
目的:探讨G蛋白偶联受体17(GPR17)在视网膜神经节细胞缺氧损伤中的作用.方法:采用氯化钴(400μmol/L)诱导RGC-5细胞化学缺氧损伤,观察GPR17的表达及GPR17配体的作用,并通过小干扰RNA(siRNA)降低GPR17的表达深入研究GPR17在细胞缺氧损伤中的作用.MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测GPR17 mRNA相对表达量.结果:氯化钴处理后,细胞中GPR17 mRNA相对表达量由0.26±0.08上调至0.36±0.05(P<0.01).与未经GPR17配体预处理的缺氧细胞比较,GPR17激动剂尿苷5'-二磷酸二钠盐、尿苷5'-二磷酸葡萄糖二钠盐、LTD4预处理细胞的存活率分别降低了29.6％ 、31.8％ 、33.9％(均P<0.01);而其拮抗剂坎格雷洛预处理细胞的存活率升高了33.2％(P<0.01).GPR17 siRNA处理可以抑制缺氧导致的GPR17 mRNA表达上调(P<0.01),减少缺氧导致的细胞凋亡[未加siRNA、NC siRNA和GPR17 siRNA组细胞的凋亡率分别为(39.73±2.06)％,(42.50±3.64)％ 和(24.98±2.16)％,P<0.01].结论:GPR17介导了RGC-5细胞的缺氧损伤,抑制GPR17表达可减轻缺氧损伤.
-
阿克苷对大鼠视网膜神经节细胞保护作用及其安全性研究
目的 观察大鼠玻璃体腔注射阿克苷的安全性及其对视网膜神经节细胞(RGC)保护作用.方法 190～210 g清洁级健康雌性Sprague Dawley大鼠50只纳入研究.其中,15只大鼠用于阿克苷玻璃体腔注射安全性研究.随机分为实验1、2、3组、对照组和空白对照组,每组3只大鼠.其中,实验1、2、3组分别玻璃体腔注射1、2、5 mg/ml的阿克苷溶液5μl;对照组玻璃体腔注射磷酸盐缓冲溶液(PBS)5 μl;空白对照组不施加任何干预.1、2、3周后摘除眼球行冷冻切片,苏木精-伊红(HE)染色光学显微镜观察视网膜结构,1、3周行超薄切片透射电子显微镜观察视网膜超微结构.其余大鼠用于阿克苷对RGC保护作用研究.随机分为手术A、B组,假手术C、D组和空白对照组.其中,手术组及假手术组各组均为8只大鼠,空白对照组3只大鼠,共35只.手术组大鼠在暴露视神经后夹持视神经10s,假手术组大鼠仅暴露视神经.手术A、B组分别经玻璃体腔注射1 mg/ml阿克苷5μl、PBS液5μl;假手术C、D组分别经玻璃体腔注射1 mg/ml阿克苷5 μl、PBS液5μl;空白对照组不施加任何干预.1、2、4周后摘除眼球行冷冻切片,部分切片HE染色后光学显微镜观察视网膜结构,计数RGC;部分切片行免疫组织化学二步法检测生长相关蛋白43(GAP 43)表达,原位切口末端标记(TUNEL)法检测RGC凋亡情况,计数RGC及阳性细胞数,计算细胞凋亡率.采用SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析.结果 阿克苷玻璃体腔安全性评价研究中,玻璃体腔注射后,大鼠角膜、前房、晶状体、玻璃体腔及视网膜均未见异常.光学显微镜观察显示,第1、2、3周时视网膜各层结构排列整齐,未见明显细胞凋亡、坏死特征及炎性细胞浸润;RGC轻度水肿.透射电子显微镜观察显示,5、2 mg/ml阿克苷玻璃体腔注射后大鼠视网膜微结构发生明显改变,1 mg/ml阿克苷注射后大鼠视网膜微结构轻微变化.阿克苷对RGC保护作用研究中,光学显微镜观察显示,手术组大鼠视网膜可见典型细胞凋亡表现,假手术组和空白对照组大鼠视网膜均未见明显改变.玻璃体腔注射后1周,手术组RGC数较假手术组和空白对照组少,第2周继续减少,手术A组RGC数多于手术B组,差异有统计学意义(F=26.206,P＜0.05).第4周手术组RGC继续减少,与第1、2周时手术组RGC数比较,差异有统计学意义(F=17.364,P＜0.05),各时间点假手术组间和假手术组与空白对照组间RGC数比较,差异无统计学意义.GAP-43检测结果显示,玻璃体腔注射后1周,手术组大鼠视网膜积分吸光度(IA)值明显高于其他组,差异有统计学意义(F=33.466,P＜0.05);手术A、B组间IA值比较,差异无统计学意义.玻璃体腔注射后2周,手术组大鼠视网膜IA值略下降,且高于其他组;手术A组IA值高于手术B组,差异有统计学意义(F=14.391,P＜0.05).玻璃体腔注射后4周,手术组大鼠视网膜IA值进一步下降;手术A组与其他组IA值比较,差异有统计学意义(F=4.178,P＜0.05).TUNEL检测结果显示,玻璃体腔注射后1周,手术组大鼠RGC凋亡明显增加,与其他组比较,细胞凋亡率差异有统计学意义(F=15.365,P＜0.05).玻璃体腔注射后2周,手术组RGC凋亡率均降低,手术A组大鼠细胞凋亡率低于手术B组,差异有统计学意义(F=12.767,P＜0.05).玻璃体腔注射后4周,手术组大鼠细胞凋亡率明显下降,与其他组比较,差异无统计学意义(F=2.057,P＞0.05).假手术组和空白对照组细胞凋亡率在各时间点、各组间比较,差异无统计学意义.结论 阿克苷玻璃体腔注射具有可行性;1 mg/ml阿克苷对大鼠视网膜影响小,为其安全剂量.玻璃体腔注射阿克苷可增加GAP-43表达,对视神经钳夹伤大鼠RGC凋亡具有一定抑制作用.
-
兔眼玻璃体内注射足叶乙苷对视网膜神经节细胞的毒性作用
目的 观察兔眼玻璃体内注射足叶乙苷对视网膜神经节细胞(RGC)的毒性作用.方法 采用随机数字法将24只健康新两兰大白兔随机分为正常组和0.0、1.5、15.0、150.0、375.0、750.0、1500.0μg 足叶乙苷组,每组3只兔,每只兔双眼用于实验.正常组不作任何处理,其余各组兔眼玻璃体内分别注射0.0、1.5、15.0、150.0、375.0、750.0、1500.0 μg足叶乙苷.注射后12 d,空气栓塞法处死所有兔.取眼球作常规病理检查,苏木精-伊红(HE)染色,光学显微镜观察视网膜形态变化、计数视网膜颞侧距视盘颞侧缘1 mm处400倍视野的RGC数量.取距视盘1 mm处颞上方1 mmX 1 mm大小视网膜行常规透射电子显微镜检查,观察视网膜超微结构变化情况.结果 光学显微镜和透射电子显微镜观察发现,正常组兔眼视网膜结构清晰规整,RGC呈球形或类球形;0.0、1.5、15.0、150.0μg足叶乙苷组兔眼视网膜各层结构与正常组相似;375.0、750.0、1500.0μg足叶乙苷组兔眼视网膜明显变薄,层次结构紊乱.正常组、0.0、1.5、15.0、150.0、375.0、750.0、1500.0μg足叶乙苷组兔眼RGC计数分别为(61.66±3.72)、(61.83±4.59)、(60.00±7.07)、(62.00±4.43)、(62.67±3.98)、(7.33±1.37)、0.00、0.00个,8组间差异有统计学意义(F=145.04,P=0.00).0.0、1.5、15.0、150.0μg足叶乙苷组兔眼RGC计数较正常组无明显变化,差异无统计学意义(F=0.244,P＞0.05);375.0μg足叶乙昔组兔眼RGC计数较正常组、0.0、1.5、15.0、150-0 μg 足叶乙昔组明显降低,差异有统计学意义(F=145.04,P＜0.05).结论 足叶乙苷对兔眼RGC有一定毒性作用,且该作用呈剂量依赖性.
-
银杏叶提取物对幼年大鼠大视网膜神经节细胞保护作用的研究
目的 观察银杏叶提取物(EGb761)对培养幼年大鼠大视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用;建立用荧光金逆行上丘标记鉴定体外培养大鼠RGC的方法.方法 12只鼠龄20 d Sprague-Dawley大鼠用荧光金行双侧上丘注射,标记RGC.6 d后摘除眼球,其中一只眼球行视网膜铺片,荧光显微镜下观察标记情况.另一只眼球摘除后分离视网膜,制成细胞悬液,倒置荧光显微镜下观察荧光着染的RGC形态.将细胞悬液分为对照组及浓度分别为0.03%、0.10%、0.30%、1.00%、3.00%的EGb761组,接种后3h,1、3、5、7 d锥虫蓝染料排斥法检测RGC的存活情况,同时记录细胞存活率.结果 逆行上丘标记后观察到RGC标记良好,视网膜细胞悬液中大RGC特征明显,离体后迅速死亡,荧光消失.锥虫蓝染料排斥法观察到在视网膜细胞悬液中,这种大RGC死亡迅速.加入不同浓度的EGb761后大RGC存活率明显增加,不同时间点与对照组比较大RGC存活率均有统计学意义(P<0.01),且呈明显剂量依赖关系(P<0.01).结论 EGb761对体外培养的RGC具有明显的保护作用;荧光金逆行上丘标记鉴定体外培养的RGC方法可行.
-
银杏叶提取物对大鼠视网膜光损伤后感光细胞的保护作用
目的 探讨银杏叶提取物(EGb761)对视网膜光损伤后感光细胞的保护作用. 方法 72只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+生理盐水组和模型+EGb 761组,每组各18只大鼠.模型组、模型+生理盐水组和模型+EGb 761组暗适应24 h后持续光照6 h,光照强度为(2740±120)lx,建立光损伤模型.模型+EGb 761组和模型+生理盐水组分别于光照前7 d每日腹腔注射0.35% EGb 761(100 mg/kg)和相应体积的生理盐水,光照后继续给药14 d;于光照后4 d对各组进行视网膜原位凋亡细胞检测,并于光照后7、14 d作组织病理学检查并计数视盘上、下方视网膜外核层(ONI)感光细胞层数. 结果 光照后4 d,除正常对照组外,其余各组ONL均出现凋亡感光细胞,但模型+EGb 761组ONL凋亡感光细胞数明显少于模型组和模型+生理盐水组.光照后7 d,模型组和模型+生理盐水组感光细胞核层数均为3～4层,模型+EGb 761组为7～8层;模型+EGb 761组平均感光细胞核层数(6.92±0.82)少于正常对照组(8.40±0.95)(t=-1.416,P<0.05),但显著多于模型组(5.96±1.36)和模型+生理盐水组(5.90±1.40)(t=1.024,1.084;P<0.05).光照后14 d,模型组和模型+生理盐水组感光细胞核为0～1层,而模型+EGb 761组仍存有3～4层;模型+EGb 761组平均感光细胞核层数(5.52±1.06)仍显著多于模型组(3.44±2.15)和模型+生理盐水组(3.37±1.91)(t=2.082,2.146;P<0.05). 结论EGb 761能部分抑制视网膜光损伤后感光细胞凋亡,对感光细胞具有一定的保护作用.
-
不同药物对视网膜神经细胞线粒体功能的影响研究
目的研究药物对视网膜神经细胞线粒体功能影响, 为进行视网膜神经细胞药物保护研究提供依据. 方法新生小牛8只眼视网膜细胞培养,用激光扫描共聚焦显微镜(Confocal)检测这些细胞在分别加入阿魏酸(FA)、精氨酸、甘氨酸、牛磺酸、脑源性神经营养因子(BDNF)和维生素E前后, 罗丹明123(dye rhodamine 123,Rh123)标记的线粒体荧光强度的变化情况. 结果 500 μg/ml FA可使线粒体荧光强度呈双相变化.扫描60.772 s首次给药后,荧光强度迅速下降(45.425±4.153→22.135±5.293), 但112.774 s再次给药后, 曲线上扬(19.655±4.383→28.247±4.764), 在168.773 s第三次给药后, 曲线仍上扬.12.5 mg/ml维生素E能增强线粒体荧光强度, 扫描56.457 s给药后,荧光强度曲线立即上扬(88.255±5.039→111.273±4.529 ).50 ng/ml BDNF可使荧光强度升高, 在58.147、 134.148 s两次给药后, 荧光强度曲线均上扬,尤以首次作用明显(69.115±5.038→77.225±5.131).2.5 mg/ml甘氨酸和30 mg/ml精氨酸作用对线粒体荧光强度无明显影响.6.25 mg/ml牛磺酸可使线粒体荧光强度轻度减弱. 结论 FA、 BDNF、维生素E可能通过线粒体途径促进视网膜神经细胞代谢,氨基酸类则可能通过非线粒体途径调节视网膜神经细胞活性.
